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目的采用RNA干扰技术将Cx43基因沉默,建立Cx43低表达犬心房肌细胞模型。通过异丙肾上腺素及快速电场起搏犬心房肌细胞,建立交感性房颤细胞模型,探讨Cx43低表达对犬心房肌细胞缝隙连接通道传导功能的作用。方法1.Cx43低表达犬心房肌细胞的转染及测定。将犬心房肌细胞体外培养并分为3组:Cx43正常表达(NE)组,不行任何处理;阴性对照(NC)组,miRNA-NC转染48小时;Cx43低表达(LE)组,Cx43siRNA转染48小时。荧光定量PCR(RT-PCR)检测心房肌细胞Cx43mRNA表达水平,western blotting(WB)检测心房肌细胞Cx43蛋白表达水平。2.缝隙连接蛋白43在异丙肾上腺素及快速电场起搏心房肌细胞模型中的研究。①将犬心房肌细胞体外培养并分为4组:对照组,不行任何处理;异丙肾上腺素组,异丙肾上腺素灌流30分钟;电场高频刺激组,电场高频刺激24小时;异丙肾+电场刺激组,异丙肾上腺素灌流30分钟,电场高频刺激24小时。RT-PCR检测心房肌细胞Cx43 mRNA表达水平,WB检测心房肌细胞Cx43蛋白表达水平。②将犬心房肌细胞体外培养并分为8组:阴性对照(NC)组,miRNA-NC转染48小时;NC异丙肾上腺素组,miRNA-NC转染48小时,异丙肾上腺素灌流30分钟;NC电场高频刺激组,miRNA-NC转染48小时,电场高频刺激24小时;NC异丙肾+电场刺激组,miRNA-NC转染48小时,异丙肾上腺素灌流30分钟,电场高频刺激24小时;Cx43低表达(LE)组,Cx43siRNA转染48小时;LE异丙肾上腺素组,Cx43siRNA转染48小时,异丙肾上腺素灌流30分钟;LE电场高频刺激组,Cx43siRNA转染48小时,电场高频刺激24小时;LE异丙肾+电场刺激组,Cx43siRNA转染48小时,异丙肾上腺素灌流30分钟,电场高频刺激24小时。RT-PCR检测心房肌细胞Cx43mRNA表达水平,免疫荧光(IF)检测心房肌细胞Cx43蛋白表达水平,划痕标记染料示踪(SLDT)检测心房肌细胞缝隙连接通道的细胞通讯功能。结果1.与NE组及NC组比较,LE组心房肌细胞Cx43 mRNA和Cx43蛋白表达量均显著减少(P<0.05)。2.①与对照组比较,异丙肾上腺素组Cx43mRNA和Cx43蛋白的表达量无明显改变(P>0.05),电场高频刺激组和异丙肾上腺素联合电场高频刺激组Cx43 mRNA和Cx43蛋白的表达量均显著减少(P<0.05)。②与NC各组比较,LE各组心房肌细胞Cx43 mRNA和Cx43蛋白表达量均明显减少(P<0.05),LE各组罗氏黄荧光在划痕附近心房肌细胞传递的距离明显缩短(P<0.05)。结论1、短暂的异丙肾上腺素刺激不影响犬心房肌细胞Cx43表达,而电场高频刺激和异丙肾上腺素联合电场高频刺激均可抑制犬心房肌细胞Cx43的表达。2、LV-Cx43siRNA可以显著抑制犬心房肌细胞Cx43表达,构建Cx43低表达犬心房肌细胞模型。3、心房肌细胞Cx43表达降低可导致细胞间缝隙连接通道信号传导功能障碍,可能对交感性房颤的发生和维持起重要作用。