果蝇黏连蛋白SOLO潜在SSE位点的研究

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减数分裂是真核生物有性生殖中的一种特殊细胞分裂方式,它包含一轮的染色体复制和两轮的细胞分裂。减数分裂过程出错会导致染色体不分离(NDJ,nondisjunction),从而产生异常的精子或卵子。在减数分裂中,染色体间黏连发挥着重要的作用,黏连由一个蛋白复合体-黏连体提供,大多数生物减数分裂的黏连体由SMC1、SMC3、REC8、SCC3/SA组成。在减数分裂的后期蛋白酶SSE被激活,剪切REC8亚基使染色体分离。然而在果蝇中还没有找到能替代REC8发挥功能的直系同源体,黏连蛋白sister on the loose(SOLO)与REC8的功能类似,SOLO的C-末端与REC8的C-末端有一定的同源性并且SOLO的C-末端也与SMC1相互结合,同时SOLO也含有5个潜在的SSE切割位点。综上所述,SOLO与REC8类似可能都是SSE的切割靶标。本研究对SOLO的5个潜在SSE位点进行3种类型的定点突变来研究其在果蝇的减数分裂中能否替代REC8发挥功能。对SOLO潜在SSE位点进行的3种突变类型分别是M1、M2、M3。M1代表SOLO的3个SSE位点分别进行的单个氨基酸突变,M2代表SOLO的5个SSE位点分别进行的单个氨基酸突变,M3代表SOLO的5个SSE位点分别进行的多个氨基酸突变。本研究采用了定点突变、表达载体构建、胚胎显微注射、遗传杂交、免疫荧光等技术。实验结果如下:1、遗传杂交NDJ统计显示,M1突变类型实验组,阳性对照组和阴性对照组NDJ分别为0.33%,47.6%,0.30%。M2突变类型实验组,阳性对照组和阴性对照组NDJ分别为0.33%,48.5%,0.20%。M3突变类型实验组,阳性对照组和阴性对照组NDJ分别为0.25%,46.6%,0.46%。上述NDJ结果表明,实验组远小于阳性对照组,却与阴性对照组大致相等,说明M1、M2、M3突变类型转基因在果蝇中发挥了拯救作用,对SOLO潜在SSE位点进行的定点突变不能引起染色体分离异常,SOLO可能不是SSE的切割靶标并且不能替代REC8。2、进一步验证了上述三种突变类型的转基因在果蝇中是否表达,对雄性果蝇精巢进行解剖,观察精巢融合蛋白Venus::SOLOM1,Venus::SOLOM2,Venus::SOLOM3荧光。结果表明实验组与阳性对照组都能观察到绿色荧光亮点,证明转基因果蝇正常表达,也表明了上述NDJ统计结果及结论是可靠的。综上所述,果蝇REC8的替代物可能是SOLO与另外一种黏连蛋白组成的一种复合体,这种黏连蛋白也存在潜在的SSE位点。本研究通过对果蝇减数分裂黏连蛋白机制的研究,能更好的为果蝇减数分裂机制的研究提供理论基础,同时也能够为其它昆虫减数分裂机制的研究提供参考,对于害虫有性生殖的研究及防控具有重大意义。
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