目的：肺癌是发病率和死亡率增长最快、对人类健康与生命危害最大的恶性肿瘤之一。自19世纪中叶Laennec首次报告以来,肺癌发病率不断上升,女性肺癌发病率的增加尤为突出。根据2008年的数据,在全世界的新发癌症病例中,肺癌分别位列男性癌症发病的第一位和女性癌症的第四位。在我国,肺癌的发病率和死亡率占男性恶性肿瘤发病率和死亡率的首位,占女性发病率的第二位,死亡率的第一位。虽经相关临床医生和研究者几十年的努力,肺癌患者总的5年生存率在美国不到15％,我国则更低。原发性肺癌中约40％是腺癌,女性中这一比例更高,而且腺癌是非吸烟肺癌患者最常见的病理类型。所以本研究旨在探讨非吸烟女性肺腺癌发生及预后的影响因素。　　 暴露环境危险因素与肺癌发生发展有着密切的关系,但是暴露相同环境中,不同个体间发病危险性仍存在很大差异;罹患肺癌后病情进展速度和生存时间也往往不同,越来越多的研究表明遗传因素在肺癌易感性及预后中均起到了重要作用。单核苷酸多态性(SNP)是最常见的遗传学改变,大量研究表明SNP可以影响肺癌遗传易感性及预后。　　 切除修复交叉互补基因组2(ERCC2)和切除修复交叉互补基因组1(ERCC1)的基因产物在核苷酸切除修复过程中发挥核心作用,X线修复交叉互补基因1(XRCC1)编码蛋白是碱基切除修复过程中的核心因子,核苷酸切除修复和碱基切除修复是人类最重要的DNA损伤修复途径,所以这三个基因编码的蛋白在DNA损伤修复中发挥重要作用。DNA修复基因单核苷酸多态性作为个体DNA损伤修复能力差异的分子遗传学基础,可能是影响肺癌发生及预后的重要遗传因素。我们假设位于DNA修复基因编码区的SNP可能改变相应修复酶的表达或活性,导致个体DNA修复能力发生变化,从而影响肺癌的发生及预后。因为XRCC1基因多态性与肺癌发生的关系,本课题组已有研究报道,所以本次研究第一部分选择核苷酸切除修复过程中核心基因ERCC2和ERCC1基因外显子中最常见的且在中国人群中罕见等位基因频率(MAF)≥5％的单核苷酸多态性作为研究位点,采用以医院为基础的病例对照研究方法结合聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)技术,探讨它们与非吸烟女性肺腺癌危险度的关系,并探讨环境暴露因素与基因多态性交互作用对患癌危险的影响。本研究第二部分是探讨ERCC2、ERCC1及XRCC1基因常见单核苷酸多态性与非吸烟女性肺腺癌预后的关系。　　 全基因组关联研究(GWAS)是在全基因组层面上,开展多中心、大样本、反复验证的基因与疾病的关联研究,全面揭示疾病发生、发展与治疗相关的遗传基因。欧裔和亚洲人群中的GWAS研究发现了不同的肺癌遗传易感性位点,提示存在种族差异。本研究第三部分选择日本与韩国人群中GWAS研究提示与肺腺癌相关的TP63基因rs10937405和rs4488809多态性作为研究位点,探讨这两个单核苷酸多态性是否影响中国非吸烟女性肺癌的遗传易感性。　　 方法：　　 本研究所有对象为相互间无血缘关系的沈阳市汉族非吸烟女性,均签署知情同意书,提供血液标本的同时,完成流行病学调查。第一部分采用病例对照研究方法,285名原发性肺腺癌病例为2002年1月至2007年11月在辽宁省肿瘤医院或202医院进行手术治疗的有明确组织病理学确诊的非吸烟女性肺腺癌患者,285名对照来自同时期在上述医院就诊的非肿瘤患者,按年龄(±5岁)与病例频数匹配。第二部分预后研究包括肺腺癌病例285人,其死亡时间由下列四种方法确定:沈阳市疾病预防与控制中心死因登记系统,医院就诊病志,沈阳市公安局死亡登记系统和电话访问,有28名病例失访,所以最终257名病例纳入分析。第三部分是以医院为基础的病例对照研究,包含435名于2004年1月至2010年7月在上述医院确诊的非吸烟女性肺癌患者和435名同时期在上述医院就诊的非肿瘤患者对照。　　 采用统一制定的调查表,由两名培训的调查员对病例及对照进行流行病学调查;调查内容包括每个研究对象详细的人口学资料,被动吸烟史、烹饪油烟暴露史、燃料种类、煤烟暴露等相关环境暴露资料,饮食等生活习惯以及亲属患癌史与职业史等。非吸烟者是指终生吸烟少于100支的个体。所有调查资料经过反复检查、核对和编码后,用Epi-info软件建立数据库并进行数据录入。采用酚-氯仿法或胍盐酸法提取基因组DNA,聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)和Taqman real-time PCR方法分析基因单核苷酸多态性。　　 流行病学调查质量控制:所有调查员都接受为期一周的标准化培训;使用统一的简明易懂的调查表;流行病学学科专家监督指导;随机抽取10％的样本二重调查,并与原始记录核对;随机抽取10％的病历,检查其完整性和准确性;编制编码手册,以检验调查表编码情况并评价数据录入工作;记录调查过程中遇到的所有问题;为减少误差,对病例和对照的调查工作在报告后2个月内完成;编制包含详细的收集、分析、保存和运输等内容的手册。实验室质量控制:进行基因分型时实验者对于标本的病例或对照状态未知,随机选择10％的样本进行盲法重复测量;Taqman法检测SNP时在每个96孔检测单元中分别设立阴性对照和重复标本作为质量控制。　　 利用SPSS13.0软件进行数据整理分析,所有的统计检验均为双侧概率检验,以P＜0.05为有统计学显著性差异。以x2检验比较人口学特征、相关危险因素暴露及SNP基因型在病例与对照之间分布的差异;以单因素和多因素logistic回归计算比值比(OR)及其95％可信区间(CI)表示相对危险度;采用非条件logistic回归分析多态基因型与肺癌的相关关系及其与暴露环境危险因素的交互作用;利用SHEsis在线分析平台计算3个SNP的连锁不平衡指数并构建单体型。生存时间以肺癌诊断时间为起点,以死亡或随访截止时间为终点。采用Kaolan-Meier和Log-rank检验对患者的一般特征、临床特征及SNP基因型进行统计和生存分析,判断出对预后有统计学意义的因素。Cox回归模型计算风险比(HR)及其95％可信区间。　　 结果：　　 本研究第一部分探讨ERCC2基因的Lys751Gln和Asp312Asn及ERCC1基因的Asn118Asn单核苷酸多态性与非吸烟女性肺腺癌危险度的关系,并探讨环境暴露因素与基因多态性交互作用对患癌危险的影响。结果发现环境因素中烹饪油烟暴露会增加非吸烟女性发生肺腺癌的危险性,对应OR及95％CI为1.61和1.13-2.30;logistic回归分析表明,在调整了年龄和油烟暴露等因素后,携带至少1个ERCC2基因751位点C等位基因(即AC或CC基因型)的个体罹患肺腺癌的危险显著增高(校正后OR=1.64,95％CI=1.06-2.52),携带ERCC1118TT基因型的个体患肺腺癌的风险是携带CC者的2.01倍(95％CI=0.99-4.10),接近统计学显著性水平(P=0.054),但ERCC2基因312位点的多态性与非吸烟女性肺腺癌的患病风险无显著性关联;交互作用分析未见ERCC2 Lys751Gln位点的变异与油烟暴露之间存在相加或相乘交互作用;单体型分析中以携带751A-312G-118C单体型的个体为参照组,携带A-G-T和C-G-C单体型的个体发生肺腺癌的危险增高,对应OR及其95％CI分别为1.43(1.07-1.91)和2.28(1.34-3.89)。　　 本研究第二部分是探讨ERCC2、ERCC1和XRCC1基因常见单核苷酸多态性与非吸烟女性肺腺癌预后的关系。结果显示ERCC1118位点为CT或TT基因型的患者生存时间比CC基因型患者的生存时间短,中位生存时问分别为11.07,6.20和17.23月(Log-rank检验P＜0.001)。携带XRCC1 Arg399Gln多态性GG、GA和AA基因型的患者中位生存时间分别为19.10、10.40和9.23月,差异有统计学意义(Log-rank检验P＜0.001)。应用Cox回归模型,校正年龄、肿瘤分期和放化疗后,我们发现携带ERCC1 Asn118Asn多态性CT或TT基因型的患者与携带XRCC1 Arg399Gln多态性GA或AA基因型的患者死亡危险度均显著高于携带纯合子野生基因型的患者。进一步分析ERCC1 Asn118Asn和XRCC1 Arg399Gln在非吸烟女性肺腺癌预后中的交互作用,结果发现同时携带两个多态位点风险等位基因型的患者比携带任何一个的患者死亡危险性更大,HR分别为2.44和1.79、1.64。　　 本研究第三部分探讨TP63基因rs10937405和rs4488809单核苷酸多态性对中国非吸烟女性肺癌危险度的影响。结果这两个SNP与肺癌的患病风险无显著性关联;但按组织学类型分别分析后显示,rs10937405位点携带至少1个T等位基因(即CT或TT基因型)的个体罹患肺腺癌的危险降低(校正后OR=0.70,95％CI=0.51-0.94),rs4488809位点为CT或CC基因型的个体发生肺腺癌的风险降低(校正后OR=0.73,95％CI=0.52-1.01),接近统计学显著性水平(P=0.056)。进一步分析TP63基因的rs10937405和rs4488809多态性等位基因频率及其与肺癌发生的关系,结果显示这两个SNP的等位基因与非吸烟女性肺癌危险度无统计学关联;按组织学类型分别进行分析,结果提示rs10937405的T等位基因可能是非吸烟女性肺腺癌的保护型等位基因(OR=0.77,95％CI=0.60-0.98)。　　 结论：　　 1、烹饪油烟暴露可能是影响中国非吸烟女性肺腺癌发生的环境危险因素。　　 2、ERCC2基因Lys751Gln单核苷酸多态性(rs13181)及TP63基因单核苷酸多态性(rs10937405和rs4488809)可能是中国非吸烟女性肺腺癌的遗传易感因素,但仍需进一步功能学研究和其它种族人群研究结果的验证。　　 3、ERCC1基因Asn118Asn位点和XRCC1基因Arg399Gln位点单核苷酸多态性可能是影响非吸烟女性肺腺癌预后的遗传因素。