第一部分骨科感染中肺炎克雷伯菌的分子诊断目的:应用分子诊断方法探究骨科感染中耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌（CRKP）菌株的耐药性质、耐药机制,以及菌株的同源性。方法:收集骨科临床中感染样本的8株CRKP,进行药敏试验确定菌株耐药情况;应用PCR技术对其耐药基因进行扩增,检测菌株的碳青霉烯酶耐药基因的携带情况;进行Carba NP试验,筛选携带耐药基因菌株的碳青霉烯酶表型,并对其产酶的表型分类;应用多位点序列分型技术检测菌株的ST分型,进行同源性分析,以明确菌株来源。结果:实验菌株对亚胺培南、左氧氟沙星、氨苄西林、头孢吡肟和替卡西林均高度耐药,对头孢唑啉和复方新诺明则均显示了良好的敏感性。PCR扩增显示有3个菌株产碳青霉烯酶耐药基因阳性,包括KPC基因、OXA-23基因和NDM基因,其余菌株未携带上述三种耐药基因。经Carba NP实验验证,发现其中一个菌株结果为阳性,为产A类碳青霉烯酶的CRKP,其他两个菌株Carba NP实验阴性,在携带耐药基因的情况下未表达碳青霉烯酶的耐药表型。8株CRKP共分为6个ST型别,包括ST11及ST22型各2株,ST70、ST234、ST412及ST37型各1株。结论:本研究综合耐药基因PCR扩增、Carba NP试验及多位点序列分型等多种分子诊断方法对骨髓炎的病原菌CRKP进行了全面分析,分离的8个菌株在耐药基因、耐药表型及MLST分型方面均差异较大,表明菌株并不同源,没有充分的证据表明这是医院感染。第二部分应用宏基因组测序方法对临床骨感染病原体的检测目的:探讨应用宏基因组测序方法直接检测骨和关节感染临床样本中的病原体微生物,对骨科感染诊断的意义。方法:收集临床确诊或疑似骨感染病例22例,将术中切除的感染组织或浓液,或用棉签沾取的创面渗出液做宏基因组测序和传统组织培养,观察并比较两种检测方法的微生物组成,结合临床录入的资料和征象,对骨感染做出诊断。结果:22例临床骨感染样本中,对8例得到有效数据的样本进行了分析。结果发现,宏基因组方法共检测到19个菌属和相应的20种细菌,以及一种病毒。不仅检测到全部培养阳性的骨科感染常见细菌,如金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌等,而且新检测到了培养阴性的病原体弗氏柠檬酸杆菌、麦氏弧菌和嗜麦芽寡养单胞等医院常见感染菌,以及一些厌氧菌。结论:宏基因组方法是直接检测骨科感染临床标本病原体微生物的非常有潜力的工具。能够迅速、准确鉴定病原体,对于临床制定有效的抗生素方案和感染的控制非常重要。如何改进采样方法提高样本微生物DNA浓度仍待进一步研究。