本研究中利用凝胶电泳和质谱技术,进行了 314例乳腺癌患者血清中疾病特异性IgG糖基化修饰和其临床分型的关系研究,发现IgG的糖型比值在乳腺癌分型中具有潜在的区分能力,为乳腺癌分型相关研究提供了新的思路。此外,为进一步提高蛋白糖基化修饰分析的效率,本研究还建立了一种利用磁性聚苯胺纳米材料用于N-糖肽富集的方法,为蛋白糖基化修饰的高效分析提供了可行的策略。1.乳腺癌分型与IgG糖基化修饰的关系研究背景:乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤,也是导致女性癌症患者死亡的主要原因。IgG是血清中含量最高的糖蛋白,其糖基化修饰变化与患者生理病理状态密切相关。对IgG糖基化修饰与乳腺癌分型的关系进行研究,有助于发现潜在的血清非侵入性生物标记物,以对乳腺癌的发生进行预警。方法:本研究运用凝胶电泳技术分离血清中疾病特异性IgG,并运用MALDI TOF MS技术进行糖基化分析研究。根据乳腺癌的病理分型、分子分型、TNM分期、年龄对患者进行分类,再利用R语言及GraphPad Prism等软件进行数据分析。结果:我们发现在乳腺癌患者中,相差一个半乳糖残基的糖型比在女性年龄大于48岁出现更年期综合征时显著下调,揭示了 IgG半乳糖基化修饰与乳腺癌患者年龄密切相关。按病理分型、分子分型、TNM分期对乳腺癌患者进行分组后,一组IgG2糖型比（G1FN/G1F与G2F/G1F、GOFN/GOF）在不同乳腺癌临床分类中均呈较强负相关。在病理分型中,IgG2糖型比G2F/G2和G2/G1呈负相关,而在浸润性癌中不相关,具有区分不同病理分型的潜力;在分子分型中,IgG2 G2/G1和IgG2 G1F/G0F、G2F/G1F;IgG2 GOFN/GOF和IgG1G2F/G1F;IgG2 G1F/G0F和G2F/G2、G1F/G1在HER2阳性患者中呈较强正相关,在Her2阴性患者中不相关,具有区分不同分子分型的潜力;同样地,在TNM分期中,IgG糖型比之间的相关性具有区分乳腺癌分期的潜力。结论:IgG半乳糖基化修饰水平在乳腺癌中与女性年龄密切相关,其糖型比在乳腺癌分型中具有潜在的区分病理分型、分子分型、TNM分期的能力。2、Fe304@PANI:—种用于高度特异性且简便富集完整N-糖肽的磁性聚苯胺纳米材料背景:基质辅助激光解吸电离质谱法（MALDI MS）已成为糖基化分析的重要方法之一。在质谱分析之前,从高度复杂的生物样品中高效分离和富集N-糖肽是非常必要的。方法:在本研究中,首先优化Fe3O4@PANI的制备方法,并且运用透射电镜、X射线衍射、Zeta电位和拉曼光谱等技术对材料进行了表征。其次,通过优化吸附和洗脱条件,建立了富集分离胎球蛋白、转铁蛋白、IgG和触珠蛋白N-糖肽的方法。最后,探究了富集方法的重复性、糖肽回收率、检测限及抗干扰能力,并与其他富集材料进行对比。结果:制备的Fe3O4@PANI大小均一,聚苯胺均匀地包覆于磁珠表面。实验方法稳定,富集8.0 pmol牛胎球蛋白的日内和日间重复性的变异系数分别小于5%和4%;回收率为78.1%;检测限为50 fmol;70倍白蛋白干扰下仍能有效富集N-糖肽;较其他富集材料（如g-C3N4和TiO2）富集能力更强且操作更加简便。此外,利用MALDIFTICRMS实现了血清触珠蛋白β链上N204和N211两个糖基化位点的63个N-糖肽的检测。结论:Fe3O4@PANI在不破坏蛋白质糖基化修饰结构的前提下,实现了低成本、环境友好、高选择性地富集分离N-糖肽。Fe3O4@PANI由于其稳定性和制备简单,在完整N-糖肽的高效富集中显示出巨大的应用潜力。