薏苡仁糖蛋白的分离纯化、结构表征及其体外抗氧化研究

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薏苡仁为禾本科植物薏苡的干燥成熟种仁,我国传统的药食两用的保健食品。薏苡仁中含有丰富的蛋白质、脂类、碳水化合物、B族维生素及钙、磷、铁、钾等,主要药理活性成分是脂类物质,现代药理学研究表明,薏苡仁具有抗肿瘤、提高免疫力、降血糖血钙、降压、抗氧化、抗炎等药理活性。本文选取薏苡仁为原料,对薏苡仁糖蛋白进行了提取、分离纯化、结构分析、及其体外抗氧化活性等方面的研究,试验主要结论如下:1.采用热水浸提法提取薏苡仁糖蛋白,在单因素试验的基础上,采用二次回归旋转组合试验统计方法对提取工艺进行优化,得到热水浸提薏苡仁糖蛋白的二次多项回归方程如下:Y=3.00750+0.24342X1+0.10863X2+0.12223X3-0.04849X12-0.07819X22-0.17029X32+0.08738X1X2+0.09287X1X3-0.03038X2X3,得到的优化提取工艺参数为:料液比1:25、提取温度56℃、提取时间5h,在此条件下,薏苡仁糖蛋白的理论得率为3.73%,验证试验得率为3.6%。2.薏苡仁糖蛋白粗品经纤维素DEAE-52凝胶柱层析分离出TDBP-1和TDBP-2二种组分,经SephadexG-100凝胶柱进一步分离纯化得到TDBP-a、TDBP-b,结合高效液相色谱法表明,TDBP-a、TDBP-b为薏苡仁糖蛋白的均一品。3.用苯酚-硫酸法和凯氏定氮法对薏苡仁糖蛋白的含糖量和含蛋白量进行测定。薏苡仁糖蛋白粗品TDBP和均一品TDBP-a、TDBP-b当中糖含量分别为46.12%、63.14%、65.78%;蛋白质的含量分别为30.32%、28.27%、26.45%。4.通过紫外光谱分析可知,TDBP-a、TDBP-b都是含有O-糖肽键的糖蛋白。通过红外光谱分析可知:薏苡仁糖蛋白均一品TDBP-a、TDBP-b分别在3400cm-1、2900cm-1、1640cm-1、1400cm-1、1020cm-1左右都有吸收峰,这些区域的吸收峰都是多糖和蛋白分子的特征吸收峰。在1020cm-1左右出现的吸收峰为C-O键吸收峰,表明TDBP-a、TDBP-b二种糖蛋白分子都含有吡喃型糖环。5.薏苡仁糖蛋白的体外抗氧化试验,结果表明:薏苡仁糖蛋白粗品具有较强的还原能力,可以有效抑制Fe+2诱导的脂质过氧化反应,对DPPH自由基、羟自由基和超氧阴离子均具有一定的清除能力,并且随着质量浓度的增大,其对自由基的清除能力和总还原能力也随之增强。
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