介观流控—阀上实验室系统光度法定量分析蛋白质的研究

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蛋白质是重要的生命物质,在生命活动过程中具有极其重要的功能,准确、快速地测定蛋白质的含量在生化、药物、食品及临床分析中具有重要意义。本论文的研究目的是结合介观流控-阀上实验室以及固体表面荧光技术,探索准确、灵敏、快速的蛋白质定量分析方法。论文首先结合微顺序注射分析技术,以刚果红为显色剂,在介观流控-阀上实验室系统中建立了一种自动、准确、快速的在线蛋白质定量分析过程。利用LOV的自动介观流控特征,有效地减少了分析过程中样品和试剂的消耗,提高了分析速度,避免了操作过程中样品的交叉污染。在进样体积为20.0μl,试剂消耗量为4.0μl的条件下,方法的线性范围为12.5~200μg ml-1,检出限为5.6μg ml-1(3σ),相对标准偏差为1.9%(50μg m1-1,n=11);分析频率可达到60 h-1。对健康人血清、尿样、市售乳饮料、酸奶中的蛋白质分析测定结果与考马斯亮蓝法结果相符。固相萃取技术是样品预处理中最常用的方法之一,对分离纯化后的组份进行定量分析,可以验证所建立的分离纯化体系的效率,常规的洗脱后再定量的检测方式由于引入洗脱剂会引起吸附后的组份发生形态变化或结构转变,使分析结果产生不可避免的误差。原位光谱检测技术如固体表面荧光方法,是根据固相表面吸附前后表面光谱性质、强度的变化与吸附物浓度的关系对吸附组份进行原位实时定量检测,无需引入洗脱剂,消除了溶剂效应,保证了样品的原始性。本论文以硅胶为吸附材料,以邻苯二甲醛为荧光探针,采用固体表面荧光方法对固相萃取过程中蛋白质的定量分析过程进行了初步研究。在最佳实验条件下,可对1~200μg ml-1浓度范围内的蛋白质进行准确定量分析,检出限为0.56μg ml-1。固体表面荧光分析方法的建立为监测固相萃取中蛋白质吸附动力学过程提供了一种可行的方案。
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