论文部分内容阅读
目的：通过测定体外受精.胚胎移植（in vitro fertilization-embryo transfer，DVF-ET）技术助孕过程中不同卵巢反应类型患者卵泡液中生长激素（growth hormone，GH）的浓度及颗粒细胞上生长激素受体（growch hormone receptor，GHR mRNA）的表达，探讨两者与卵泡发育及获卵数、胚胎质量及妊娠结局的关系，为GH在临床上的应用提供一定的理论依据。
方法：
1研究对象：
选择2008年6月至12月就诊于河北医科大学第二医院生殖医学科因输卵管因素或男方因素接受IVF-ET或ICSI（intracytoplasmic sperm injection，ICSI）的患者34例，年龄22-37岁之间（平均年龄30.571±7.86岁），月经周期规则，基础体温呈双相型，基础血清（月经第2-3天）卵泡刺激素（FSH）、黄体生成素（LH）、雌二醇（E2）、睾酮（T）在正常围内。所有患者均无内分泌紊乱疾病如：多囊卵巢综合征、甲亢、高泌乳素血症等，排除子宫内膜异位症、子宫腺肌病。
2研究方法和标本测定：
2.1分组：
根据获卵数将患者分为A、B、C三组，A组（卵巢低反应型）9例（获卵<5枚），B组（卵巢正常反应型）15例（获卵5～19枚），C组（卵巢高反应型）10例（获卵>19枚）。
2.2标本采集：
所有患者经控制性卵巢刺激（controlled ovarian simulation，COS）后，根据阴道超声及血清LH、E2水平监测卵泡发育，当B超监测下有一个卵泡平均直径≥18 mm，两个卵泡平均直径大于≥17mm，或者3个卵泡平均直径≥16mm卵泡时，于当晚21：00注射HCG5000-10000IU。34小时后在阴道超声引导下行采卵术。取未被血污染的卵泡液经2000r/min离心10min，上清液置于-20℃冰箱保存。经拾卵后的所有卵泡液用Ficoll梯度离心法分离颗粒细胞，加入Trizol，置1.5ml EP管中，经液氮快速冷冻后于-80℃冰箱保存。
2.3标本测定：
卵泡液中GH水平用放免法测定，逆转录多聚酶链反应法（reverse transcription polymerase chain reaction，RT-PCR）测定颗粒细胞GHR mRNA相对表达量。
结果：
1不同反应类型卵巢颗粒细胞上GHR mRNA的相对表达量
A、B、C三组COS后颗粒细胞GHR mRNA的相对表达量分别为0.143±0.028，0.203±0.057和0.170±0.027，A组与B组相比有统计学差异（P<0.05）。B组与C组，A组与C相比无统计学差异（P>0.05）。（附图1、2）
2不同反应类型卵巢卵泡液中GH水平
A、B、C三组COS后卵泡液中GH水平分别为2.079±0.386ng/ml，2.556±0.394ng/ml和3.004±0.621ng/ml，C组GH水平明显高于A组与B组，差异有统计学意义（P<0.05），B组高于A组，差异有统计学意义（P<0.05）。（附图3）
3颗粒细胞上GHR mRNA的相对表达量与获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、受精率、卵裂率、优质胚胎率、促性腺激素（gonadotropin，Gn）用量均无相关关系（P>0.05）。（附表3）
4卵泡液中GH水平与获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数呈正相关（P<0.05）；与Gn用量呈负相关（P<0.05）；与卵裂率、受精率、优质胚胎率无相关关系（P>0.05）。（附图6-10，附表2）
5妊娠组与非妊娠组卵巢颗粒细胞GHR mRNA的相对表达量比较
妊娠组颗粒细胞GHR mRNA的相对表达量（0.201±0.053）高于非妊娠组（0.164±0.044），但差异无统计学意义（P>0.05）。（附图4）
6妊娠组与非妊娠组卵泡液中GH水平比较
妊娠组与非妊娠组卵泡液中GH水平比较，妊娠组GH水平（2.763±0.677ng/ml）高于非妊娠组（2.514±0.507ng/ml），但差异无统计学意义（P>0.05）。（附图5）
7卵泡液中GH水平与颗粒细胞上GHR mRNA表达量呈正相关（r=0.4271，（P<0.05）（附图11）
结论：
1卵巢刺激时卵巢对促性激素的反应与卵泡液中GH水平有关，卵巢高反应者卵泡液GH水平较高，卵巢正常反应者次之，卵巢反应低下者卵泡液中GH水平最低。
2颗粒细胞上GHR在卵巢正常反应者表达量最高。
3卵泡液中GH水平与获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数呈正相关，与Gn用量呈负相关，提示卵泡液中GH水平直接影响卵泡发育、卵母细胞的成熟及胚胎发育。
4颗粒细胞上GHR mRNA的表达量与与获卵数、受精数、卵裂数、优质胚胎数、受精率、卵裂率、Gn用量相关分析结果显示均无相关关系。
5妊娠组卵泡液中GH水平与颗粒细胞上GHR mRNA表达量高于非妊娠组。
6卵泡液中GH水平与颗粒细胞GHR mRNA的表达量呈正相关，提示外源性应用GH可能通过上调细胞膜上GHR mRNA的表达量来发挥作用。