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[目 的]探究人甲状腺鳞癌SW579细胞中雌激素相关受体表达情况,以及阻断其表达雌激素受体前后,染料木黄酮对SW579细胞增殖、细胞凋亡和周期的影响及其机制,为明确染料木黄酮作用于人甲状腺癌SW579细胞可能的影响机制提供实验依据。[方 法]将人甲状腺癌细胞SW579细胞分空白对照组,染料木黄酮处理组(10、20、40、80、160、200、320μmol/L,G15未处理组)和雌激素相关受体阻断组(G15预处理合并染料木黄酮处理)。1.运用实时荧光定量聚合酶链反应(Real Time Quantitate PCR)检测人甲状腺癌细胞SW579中雌激素核受体ERα、ERβ和雌激素膜受体GPR30的表达情况及染料木黄酮对其的影响;2.运用MTT法确定GPR30的特异性阻断剂G15作用人甲状腺癌SW579的有效作用浓度及时间;3.运用MTT法检测特异性阻断GPR30前后染料木黄酮对人甲状腺癌SW579细胞增殖影响;4.运用Annexin V/FITC流式细胞技术检测特异性阻断GPR30前后染料木黄酮对人甲状腺癌SW579细胞周期和凋亡的影响;5.运用转录组测序方法检测不同染料木黄酮对人甲状腺癌SW579细胞作用后筛选差异性表达基因和信号通路及验证;6.统计学方法:数据采用SPSS 21.0软件进行统计学分析,以P<0.05为差异有统计学意义。[结果]1.PCR结果显示SW579细胞表达ERβ和GPR30受体,不表达ERα。且当染料木黄酮浓度≥40μmol/L作用24h及浓度≥80μmol/L作用48h,SW579细胞中ERβ基因表达显著增强(P<0.05);染料木黄酮浓度≥40μmol/L作用24和48h,SW579细胞中GPR30基因表达显著增强(P<0.05)。2.由 MTT 法可知 G15 在 SW579 细胞中的 IC50 为 15.17μmol/L,5μmol/L 的G15作用SW579细胞2小时,对其增殖无显著影响,确定G15处理SW579细胞的时间为2小时,浓度为5μmol/L。3.染料木黄酮浓度≥40μmol/L作用SW579细胞24和48h,可显著促进增殖,而G15特异性阻断GPR30后,且浓度≥80μmol/L时,染料木黄酮对SW579细胞的促增殖作用显著减弱(P<0.05)。当染料木黄酮浓度至≥200μmol/L作用48h时,无论GPR30是否被阻断,SW579细胞的增殖都显著被抑制,而G15特异性阻断GPR30后的抑制作用更显著(P<0.05)。4.流式细胞技术检测细胞凋亡,结果显示,染料木黄酮作用于SW579细胞24和48h,对其凋亡无明显影响,而GPR30被阻断后,当染料木黄酮剂量≥80μmol/L,SW579细胞凋亡率显著增大,且随时间增加凋亡率显著增加。细胞周期结果显示,GPR30被阻断前,SW579细胞周期主要阻滞在S期,阻断后,染料木黄酮剂量≥80μmol/L时,SW579细胞周期被阻滞在G2/M期。5.转录组测序结果显示,染料木黄酮作用人甲状腺癌SW579细胞后,使与癌症通路相关的33个基因发生显著变化,其中21个基因上调,12个基因下调,随机筛选上调的CDKN1A、FOXO1、DAPK、FOS基因和下调的EGF、FTGS2基因进行实时荧光定量PCR验证,验证结果与转录组筛选结果一致。6.据转录组测序结果筛选,染料木黄酮160μmol/L作用SW579细胞48h后,在PI3K-Akt、Ras、MAPK、Hippo、Wnt通路中有多个基因发生明显上调,PI3K-Akt、AGE-RAGE、MAPK、FoxO通路中有多个基因发生明显下调;CDKN1A、FOXO1、FOS、PLCG2基因在多个通路中发生显著上调,EGF、PTGS2、CXCL8基因在多个通路中发生显著下调。[结 论]1.人甲状腺癌SW579细胞中不表达ERα,表达ERβ和GPR30受体,染料木黄酮可显著上调SW579细胞中ERβ和GPR30基因的表达。2.特异性阻断人甲状腺癌SW579细胞中GPR30,染料木黄酮剂量≥80μmol/L时,可显著促进SW579细胞凋亡,细胞周期被阻滞在G2/M期。3.染料木黄酮作用人甲状腺癌SW579细胞后,可使与癌症通路相关的33个基因发生显著变化,其中21个基因上调,12个基因下调。4.染料木黄酮对SW579细胞的促增殖作用可能与PI3K-Akt、Ras、MAPK、Hippo、Wnt、AGE-RAGE、FoxO 通路有关,CDKN1 A、FOXO1、FOS、PLCG2、EGF、PTGS2、CXCL8可能是其靶基因。