山楂中主要成分HPLC测定方法的研究

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山楂作为一种重要的药用食用植物资源,在我国有大量的种植栽培面积,产量十分可观。通过药理学研究表明,山楂含有多种重要的生理活性成分,这些生理活性成分与山楂中所含的前花青素、黄酮、酚酸、三萜及有机酸等有关。本文采用高效液相色谱仪建立了一套山楂中主要成分的HPLC分析方法,并用此方法对山楂中的山楂酸、熊果酸、齐墩果酸、绿原酸、异绿原酸、前花青素B2、B5、Cl、表儿茶素、金丝桃苷、异槲皮素、柠檬酸和草酸等主要活性成分进行了分析。所使用的高效液相色谱仪为大连依利特有限公司生产,由两台P230II高压恒流泵、UV230II紫外可变波长检测器以及EC2006色谱工作站等部分组成。山楂中三萜的测定色谱条件:色谱柱:Thermo HypersiLC18ODS(250nm×4.6mm,5μm);流动相:乙腈-甲醇-水(含1g·L-1磷酸,3mg·L-1六次甲基四胺)(60:25:15);流速:0.8mL·min-1;检测波长:210nm;柱温:30℃;进样量:10μL。山楂酸、熊果酸和齐墩果酸回归方程的相关系数分别为0.9996,0.9998,0.9997;线性范围:0.051~0.256μg,0.082~0.431μg,0.022~0.106μg;回收率:1.09%,0.96%,1.08%。山楂中黄酮、前花青素、酚酸活性成分的测定色谱条件:色谱柱:Thermo HypersiLC18ODS(250nm×4.6mm,5μm);流动相:A:500μL/L的磷酸水溶液;B:甲醇/乙腈=30:70,含500μL/L的磷酸;梯度洗脱程序:(min/B%)0/14,8/14,15/18,25/18,36/50,40/50,40/14:检测波长:280nm(0~8min),340nm(8-36min),280nm(36~40min);流速:0.8mL· min-1;温度:30℃;进样量:10uL。实验结果表明各活性成分的分离效果较好,各组分回归方程的相关系数r为0.9991~0.9998,相对标准偏差RSD<5.0%,回收率在97.09%~104.55%,40min完成一次分析。山楂中有机酸活性成分的测定色谱条件:色谱柱:Thermo HypersiLC18ODS(250nm×4.6mm,5μm);流动相3%甲醇-40mmol/L KH2PO4-H3PO4(pH=2.54),检测波长;215nm;流速:0.8mL·min-1;温度:30℃;进样量:10uL。实验结果表明各活性成分的分离效果较好,各组分回归方程的相关系数r为0.9945~0.9968,相对标准偏差RSD<5.0%,回收率在88.96%~107.14%。以上方法操作简单、快速和准确等优点,可以作为山楂生药、山楂提取物、山楂制剂以及各种加工产品的质量控制和分析检测。分析结果表明,山楂中的三萜类物质中以熊果酸含量较高,酚酸类物质主要为金丝桃苷和异槲皮素两种,前花青素类物质的含量比较高可以认为是山楂果实活性物质的代表性成分;有机酸类物质中以柠檬酸含量较高。本文的创新点一是实现了山楂酸、熊果酸与齐墩果酸的同时,该方法具有较好的准确度、精密度和灵敏度;二是利用可变波长分析方法使山楂的主要成分都在其最大吸收波长出峰,从而使分析效果达到最佳。
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