高温光合细菌Thermochromatium tepidum发酵生产CoQ10的研究

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辅酶Q10(Coenzyme Q10)是一种具有环状醌结构的脂基化合物,又称泛醌(Ubiquinone,缩写UQ),广泛分布在所有活细胞中,尤其是线粒体。它是呼吸链组分之一;其在线粒体内膜上的含量远远高于呼吸链其他组分的含量,而且脂溶性使它在内膜上具有高度的流动性,特别适合作为一种流动的电子传递体。它是线粒体能量产生的重要因素。近些年来国内外以微生物发酵法制备CoQ10逐步成为研究热点。如:红极毛杆菌、脱氮极毛杆菌,甲烷微环菌等成为生产CoQ10的重要研究对象,国内也有以光合细菌(Photosynthetic bacteria,简称PSB)制备CoQ10的报道。光合细菌是一类最早期拥有光合系统的原核生物,普遍的生存在大自然中,种类繁多。本研究中所使用的Thermochromatium(Tch.)tepidum(Ttp)是1984年在美国黄石国立公园的猛犸温泉被搜集,培养温度46℃50℃,是一种嗜热的紫色嗜硫磺光合细菌。Thermochromatium(Tch.)tepidum是一类无任何危害的革兰氏阴性菌,它拥有最早期的光能合成系统,能在好氧黑暗或厌氧光照条件下生长,同时能够充分摄取环境中的硫化物、有机物等物质进行生物合成的一类原核生物,普遍存在于自然界。在本研究中首先确立了CoQ10的测定方法,根据已有的文献报道的三种CoQ10的测定方法,即紫外分光光度法、可见分光光度法和高效液相色谱法。在本研究中主要以紫外分光光度法测定CoQ10。产量最通过研究发现,最佳培养温度48℃,最适pH条件为pH7.2,CoQ10产量最高。在pH7.2时,细菌生长最好,CoQ10产量最高。CoQ10在Thermochromatium(Tch.)tepidum处于稳定生长期时进行提取结果最佳,CoQ10平均产量随着生物量的增加而增加,实验中所测定的产量为108.5 mg/L。由于CoQ10具有氧化/还原两种形态,可以通过滴加氧化剂(FeCl3)和还原剂(Na2S2O3)进行确认,样品在没有加入氧化剂和还原剂时,吸收峰在275 nm,加入氧化剂后吸收峰仍为275 nm,加入还原剂时,吸收峰变为265 nm,可以确定实验中提取的CoQ10为氧化型。CoQ10提取液在60℃中放置一小时后发现其在275 nm处峰值基本无变化,说明其具有良好的热稳定性。Thermochromatium(Tch.)tepidum CoQ10在pH1.6-13.0范围内时吸收峰没有变化,结构稳定。通过本课题的研究,我们已经从Thermochromatium(Tch.)tepidum中成功提取CoQ10并对其提取工艺及性质进行了初步探讨,为CoQ10的生产提供一种新途径。
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