研究背景:同种瓣具有良好的血流动力学和较高的抗感染特性,但在部分接受同种瓣移植的患者中出现衰败加速的问题,其原因主要与瓣膜本身的免疫原性和冻存过程中造成的组织损伤有关。近年来,几种组织玻璃化保存方法被提出,研究显示玻璃化方案具有降低组织免疫原性的作用。但一方面,其免疫调节机制不明确,且玻璃化组织活性与免疫原性间的关系存在争议,另一方面VS83方案中存在严重组织活性损害,需要进一步改进。目的:(1)探究VS55方案对带瓣主动脉组织免疫原性的影响及其与NLRP3炎性小体激活的联系,阐明玻璃化组织活性与其免疫原性间的联系。(2)在VS83方案中加入抗氧化剂Mito Q,探索该方案对组织活性的提升作用及其对组织细胞线粒体动力学的影响。方法和结果:第一部分研究使用新西兰兔带瓣主动脉作为实验材料,为消除不同保存方法内皮残留不同对实验结果造成的影响,我们首先对组织进行了脱内皮处理。将脱内皮后的组织,随机分为新鲜对照组、梯度降温组(CFC组)和VS55方案组(IFC组),并使用不同方案保存。8周后取出保存的组织,进行组织复温,对复温后组织的活性和组织内ATP水平以及NLRP3炎性小体激活情况进行检测,随后我们将组织包埋至家兔皮下,2周后检测组织内TNFα和IL-6表达水平。结果显示,各组带瓣主动脉去内皮完全,IFC组在组织活性和ATP含量与CFC组相近的情况下,表现出NLRP3炎性小体的激活抑制。在皮下包埋后,IFC组相对于其他两组,出现组织内TNFα和IL-6表达的降低。第二部分研究主要针对VS83方案中组织活性损害问题进行改进和探索。仍以新西兰兔带瓣主动脉作为研究材料,设置新鲜对照组(A)、梯度降温组(B)、VS83方案组(C)和VS83联合抗氧化剂Mito Q(20 n M)方案组(D)。将各组组织按照不同方案保存8周,复温后立即行常规染色和组织活性氧(ROS)水平检测,透射电镜下观察线粒体形态学改变,在体外组织培养3小时后,检测各组组织活性、ATP含量及线粒体动力相关蛋白(Mfn2、Drp1)表达情况。结果显示,复温后C组组织活性和线粒体均存在严重损害,相比于C组,D组内活性氧水平降低,线粒体损害减轻,组织活性明显提高,并在复温早期出现Mfn2表达的升高。结论:(1)VS55方案能够降低带瓣主动脉组织的免疫原性,其机制可能与NLRP3炎性小体表达降低有关,而玻璃化组织活性的高低并不是影响其免疫原性的主要因素。(2)在VS83方案中加入抗氧化剂Mito Q,能够提高玻璃化带瓣主动脉组织的保存活性,该作用与复温早期线粒体融合增强有关。