目的：本课题将软骨组织进行脱细胞处理,利用脱细胞基质材料制备含生物来源软骨多孔支架材料,将该支架在体外接种自体骨髓来源的间充质干细胞,构建细胞-支架复合体,建立兔膝关节全层软骨缺损模型,并应用微骨折技术结合植入细胞-支架复合体修复兔膝关节软骨缺损,观察软骨生成及修复效果。设置空白对照组、微骨折组、单纯支架组、微骨折结合植入空白支架组、微骨折结合植入细胞-支架复合体5组,进行对比研究。3月后处死动物取标本行大体观察及组织学检测。为仿生制备软骨复合支架材料提供实验依据,同时为软骨修复的临床及基础研究探讨一种新的有效的方法。材料和方法：1.将天然人软骨在蛋白酶抑制剂保护下粉碎,采用离心分选软骨微粒,经过软骨脱细胞处理后制备软骨脱细胞微粒悬液,行组织学,生化定量分析及理化性能检测。2.采用冻干法及化学交联法制备含脱细胞软骨基质支架,体外培养兔骨髓间充质干细胞,将兔骨髓间充质干细胞接种于软骨支架上,体外培养7天行组织学,组织相容性和细胞毒性检测,并将细胞-支架复合体结合微骨折移植于兔膝关节软骨缺损区。3.制备兔负重区全层软骨缺损模型,设置空白对照组、微骨折组、微骨折结合植入空白支架组、植入空白支架组及植入细胞-支架复合体结合微骨折5组,每组6只兔,12个膝关节,3月后处死动物取标本行大体观察及组织学检测(包括HE染色、藩红O染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化)结果：术后3个月取标本大体检查发现,空白对照组3个膝关节不完全修复,9个无修复；微骨折个12例膝关节软骨缺损8个完全修复,但修复后的软骨较实验组明显变薄,HE染色为纤维软骨,蕃红O染色、甲苯胺蓝染色和Ⅱ型胶原免疫组化均为阴性。单纯支架组12个膝关节8个为不完全修复,边缘修复较差,其中1个软骨缺损区为瘢痕组织覆盖,4个无修复。微骨折结合支架组12个膝关节7例完全修复,5个为不完全修复。实验组12个膝关节10个完全修复,2个不完全修复。组织学显示修复区由透明软骨样组织构成,细胞周围出现软骨陷窝,数量多,排列不规则,表层细胞体积较小,数量稍多,深层细胞体积稍大,细胞外基质较少,蕃红O及甲苯胺蓝染色阳性,修复面平整,与邻近软骨分界清楚,未见淋巴细胞浸润,细胞外基质Ⅱ型胶原免疫组织化学染色阳性。微骨折及单纯支架移植组,缺损区为纤维组织覆盖,细胞为长梭形的成纤维样细胞,修复面不平整,可见明显凹陷组织,软骨侧支架材料大多降解吸收,未见淋巴细胞浸润,软骨支架可见血管侵入,甲苯胺蓝染色弱阳性,蕃红O及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色未见阳性。结论：1.骨髓间充质干细胞可在体外分离、纯化、扩增,可作为软骨组织工程的种子细胞用于全层软骨缺损修复。2.该方法制备的脱细胞软骨基质支架的多孔结构,该结构可用于接种种子细胞,且该支架为全生物来源,无细胞毒性,在体内完全吸收,可作为组织工程支架。3.本实验中脱细胞软骨支架复合细胞结合微骨折修复能力及修复效果均最好,提高了微骨折的修复效率。证明该支架通过接种自体骨髓间充质干细胞结合微骨折技术能较好的修复兔负重区软骨缺损,此方法提示在软骨损伤修复的组织工程应用中具有一定的价值及前景。