萎缩芽孢杆菌SF1小分子代谢物抑制尖孢镰刀菌作用机制研究

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本论文以一株实验室自主分离的萎缩芽孢杆菌SF1为研究对象,采用非靶向代谢组学技术分析了菌株产生胞外小分子代谢物,从中筛选对胡麻枯萎病病原菌具有良好抑制效果的物质,为菌株SF1开发为微生物源杀菌剂提供了实验数据。主要结论如下:
  (1)分别采用冷甲醇灭活法和快速过滤分离菌体两种淬灭方法对萎缩芽孢杆菌SF1胞外代谢产物进行了分离。结果表明SF124h代谢物抑菌率要高于SF148h代谢物,但两种方法获得的提取物抑制率不存在统计学差异。
  (2)采用气相色谱-飞行时间质谱联用技术(GC-TOF-MS)对菌株SF1胞外代谢物进行非靶向代谢组学检测,运用主成分分析、正交偏最小二乘法-判别分析法对数据进行分析,共筛选出83种差异代谢物。
  (3)以抑菌率和对环境的影响为筛选指标,菌株SF1的差异代谢物中筛选出56种抑菌能力较强的物质。毒力测定实验结果表明,枯茗酸和吲哚乙酸对尖孢镰刀菌的抑制中浓度(EC50)分别为10.406mg/mL和70.110mg/mL。
  (4)光学显微镜、扫描电镜和透射电镜观察表明,吲哚乙酸和枯茗酸均可导致胡麻枯萎病病原菌菌丝生长异常;荧光染色后激光共聚焦显微镜观察表明,枯茗酸和吲哚乙酸均会破坏病原菌菌丝细胞膜,影响细胞壁中几丁质,还可使菌丝细胞中活性氧(ROS)不同程度累积,促使细胞发生氧化损伤,从而抑制病原菌生长。
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