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背景与目的子宫内膜癌是妇科常见的恶性肿瘤,近年来其发病率特别是年轻患者的发病率呈上升趋势。子宫内膜癌的发病机制尚不明确,表观遗传学的改变在肿瘤的发生发展过程中起重要作用。就目前而言,SOX17在子宫内膜癌发生发展中的作用尚不明确,本研究旨在探讨SOX17与子宫内膜癌发生发展的关系。SOX17是经典Wnt信号通路的重要拮抗剂,通过抑制β-catenin/TCF依赖性转录及癌细胞增殖和集落的形成,从而调节Wnt/β-catenin信号转导。多项研究表明,SOX17启动子的高甲基化是SOX17基因失活的主要原因,其在组织中呈现低表达率,进而导致癌细胞的增殖。另有研究表明SOX17的抑制肿瘤机制可能与其使细胞停滞在G1/S期,诱导凋亡、调节肿瘤细胞的血管生成的作用有关。由此得出SOX17可能在人类抑癌作用中发挥作用,但其在人类子宫内膜癌中的潜在作用尚未阐明。人体肿瘤是一种细胞周期性疾病,细胞周期素D1(Cyclin D1)作为细胞周期的正向调节因子,促进了肿瘤细胞的增殖。甲基转移酶抑制剂5-氮杂胞苷(5-AZA)能够通过去甲基化作用使过甲基化的基因重新表达,从而恢复其抑癌功能。我们的前期研究已表明SOX17基因在子宫内膜癌组织及细胞株中表达下降,与其启动子处于高甲基化状态有关,本研究利用去甲基化药物5-AZA作用子宫内膜样腺癌细胞,实时荧光定量PCR检测药物作用前后SOX17和Cyclin D1基因的表达,同时对子宫内膜样腺癌组织中SOX17和Cyclin D1表达水平进行检测,旨在探讨SOX17在子宫内膜样腺癌的发生发展中的作用及其可能机制。材料与方法1.实验材料1.1细胞来源:人子宫内膜样腺癌细胞株HEC1A中分化,由郑州大学第一附属医院重点实验室馈赠。1.2组织标本来源与病例资料:收集2014年7月~2016年12月于郑州大学第二附属医院行子宫切除的子宫内膜组织标本,术中标本离体后立即取材,迅速置于-80℃保存。所取标本包括30例子宫内膜样腺癌组织和10例正常增生期子宫内膜组织,所有标本均经郑州大学第二附属医院病理科确诊。2.实验方法2.1实验分组:所收集标本共分两组,子宫内膜样腺癌组30例,正常增生期子宫内膜组10例(因宫颈上皮内瘤变手术切除子宫的子宫内膜组织),入组患者术前均未进行放疗、化疗、激素免疫治疗及其他抗肿瘤治疗,且排除合并其他部位肿瘤的患者,组织标本均由病理科医师镜下观察确诊。2.2正常增生期子宫内膜组织和子宫内膜样腺癌组织中SOX17、β-catenin和Cyclin D1基因的m RNA表达情况:采用实时荧光定量PCR技术对上述30例子宫内膜样腺癌组织和10例正常增生期子宫内膜组织中SOX17、β-catenin和Cyclin D1基因表达情况进行检测。2.3 5-AZA对子宫内膜样腺癌细胞增殖的影响:采用细胞培养技术,用不同浓度5-AZA处理子宫内膜样腺癌细胞株HEC1A,检测细胞生长抑制情况。使用MTT法检测24h、48h、72h不同浓度的5-AZA对HEC1A细胞的生长抑制作用的影响;采用实时荧光定量PCR检测处理前后HEC1A中三种基因的m RNA表达情况。3.统计方法应用SPSS 23.0软件包对数据进行统计学分析,定量资料描述应用(?),组间采用独立样本t检验,单因素方差分析及Pearson相关分析,以P<0.05差异有统计学意义,以α=0.05为检验水准。结果1正常子宫内膜组织和子宫内膜样腺癌组织中SOX17、β-catenin和Cyclin D1基因的m RNA表达情况。本实验检测结果显示,SOX17基因在子宫内膜样腺癌组织中表达水平下降,同时β-catenin和Cyclin D1基因在子宫内膜样腺癌组织中表达升高,与正常增生期子宫内膜组织相比,差异均有统计学意义(P<0.05)。在30例子宫内膜样腺癌组织标本中,SOX17、β-catenin和Cyclin D1基因m RNA相对表达量在组织学分级、淋巴结转移及FIGO分期中表达差异均有统计学意义(P<0.05)。其中β-catenin及Cyclin D1的m RNA相对表达量在肌层浸润深度中差异有统计学意义(P<0.05)。2 5-AZA对子宫内膜样腺癌细胞增殖的影响使用不同浓度5-AZA处理HEC1A细胞72h后,经MTT法检测,细胞的生长抑制作用差异具有统计学意义(P<0.05),且处理72h后对细胞生长作用抑制最明显(IC50=12.033)。随着处理时间的增长,不同浓度5-AZA对HEC1A细胞生长抑制效果增强,且差异有统计学意义(P<0.05);5-AZA处理子宫内膜样腺癌细胞后SOX17基因表达较处理前明显增高(P<0.05),同时β-catenin和Cyclin D1基因的m RNA表达明显降低(P<0.05)。3子宫内膜样腺癌组织中SOX17和Cyclin D1基因的相关性分析本文对30例子宫内膜样腺癌组织中Cyclin D1、β-catenin及SOX17基因的m RNA相对表达量进行pearson两两相关性分析发现,SOX17及Cyclin D1在子宫内膜样腺癌组织中的表达呈弱负相关(r=-0.353,P>0.05),SOX17与β-catenin在子宫内膜样腺癌组织中表达呈负相关(r=-0.463,P<0.05),β-catenin和Cyclin D1的表达在子宫内膜样腺癌组织中呈明显正相关(r=0.863,P<0.001)。结论1.SOX17基因可能作为一种潜在的肿瘤抑制因子,通过下调Cyclin D1及β-catenin基因的表达来实现其肿瘤抑制作用,为子宫内膜样腺癌的基因治疗提供新的思路。2.去甲基化药物5-AZA可提高SOX17基因在子宫内膜样腺癌细胞株中的表达,并明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖,在未来子宫内膜癌的临床治疗中,其可能成为潜在有效的治疗药物,通过作用SOX17基因来实现其抗癌作用。