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犬细小病毒病[1],是由犬细小病毒(Canineparvovirus,以下简称CPV)感染犬只而引起的一种常见的具有高度接触性传染的犬传染病,通常在临床上以心肌炎型和肠炎型为主。该病发病率高,死亡率高,严重危害我国养犬业,造成了巨大的经济损失。其中,肠炎型的犬细小病毒病发病初期犬表现为精神沉郁、轻微呕吐,腹泻且粪便呈稀状,随着病情的发展,腹泻次数增加,血便呈咖啡色或番茄酱色并有腥臭味,犬只出现严重的脱水症状,体重明显的降低[2]。针对以上肠炎型犬细小病毒病的症状,根据中兽医辩证施治的理论,经过严格的组方筛选,选用黄芩、苦参、白头翁等几味中药组方成复方苦芩。复方苦芩具有清热解毒,燥湿止痢的功效。本研究旨在探讨复方苦芩及其活性成分总生物碱、总黄酮和总多糖作用机理。
第一,探索了复方苦芩及其有效活性成分对免疫低下小鼠免疫功能的影响。结果表明:与模型组比较,复方苦芩及其有效活性成分能显著提高免疫抑制小鼠碳粒廓清指数,脾脏指数和胸腺指数,同时还能显著提高免疫抑制小鼠血清溶血素水平以及T、B淋巴细胞转化率。故复方苦芩及其有效活性成分能有效地保护小鼠免疫系统,通过调节机体的特异性或非特异性免疫从而增强机体的免疫功能,提示复方苦芩中总生物碱、总黄酮和总多糖是其作用物质基础之一。
第二,探讨了复方苦芩及其有效活性成分对细小病毒病犬血清NO、NOS和细胞因子IL-4、IFN-γ的影响,利用ELISA以及相应试剂盒检测复方苦芩及其有效活性成分对犬血清中NOS活性和NO与细胞因子IL-4、IFN-γ含量变化的影响。结果显示:复方苦芩及其有效活性成分均能降低犬细小病毒引起的犬血清NOS活性、NO含量以及IL-4含量的增加,提高因犬细小病毒引起的犬血清中IFN-γ含量的降低。表明,复方苦芩及其有效活性成分对细小病毒病犬免疫功能有一定的调节作用。
第三,探讨了复方苦芩及其有效活性成分对细小病毒病犬细胞因子IL-4、IFN-γmRNA的影响,通过分离各组犬外周血中的淋巴细胞,提取总RNA,用荧光定量PCR(RT-PCR)检测复方苦芩及其有效活性成分对细小病毒病犬IL-4、IFN-γmRNA的影响。结果显示,复方苦芩及其有效活性成分能降低因细小病毒病引起的IL-4mRNA表达的增加,提高因细小病毒引起的IFN-γmRNA表达的降低。表明,复方苦芩及其有效活性成分能提高细小病毒病犬免疫功能,其中有效活性成分中复方苦芩总多糖效果最优。
综上所述,复方苦芩及其有效活性成分对细小病毒病犬免疫功能都有一定的保护作用,其机制可能是通过降低病犬IL-4mRNA的表达,升高IFN-γmRNA的表达来实现的,改善病犬的免疫功能,从而有效地防治犬细小病毒病。