大蒜药材物质群特征成分分析及质量研究

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目的:大蒜(Allium Sativum L.)是具有数千年历史的药食两用植物,作为药材、食品补充剂、草药列入各国药典,但其质量控制标准存在较大差异,特别是中国药典中大蒜质量标准与国际标准还存在较大差距。本研究参照国外药典对大蒜质量进行研究,为2010版《中国药典》中大蒜质量标准修订提供参考;根据国内外公认的活性成分群,研究大蒜药材氨基酸类和含硫化合物类物质群TLC、HPLC指纹图谱,采用几种数学模式提取与表达指纹图谱提供的物质群特征成分信息,筛选出能够对不同葱属植物之间的真伪、不同产地大蒜之间的品质优劣进行评价的有效方法;探讨大蒜微乳薄层鉴别方法,并用于大蒜二维薄层研究,为大蒜薄层鉴别提供新技术。方法:1.采用TLC分别建立大蒜中氨基酸类和含硫化合物类物质群薄层指纹图谱,并对不同葱属植物、不同产地大蒜的物质群TLC指纹图谱进行相似度分析、聚类分析、主成分分析、数值分类法分析,提取与表达大蒜物质群TLC指纹特征。2.采用HPLC分别建立大蒜中氨基酸类和含硫化合物类物质群HPLC指纹图谱,采用相同的几种数学模型对两类物质群HPLC指纹图谱进行分析。3.参照国外药典分别建立大蒜薄层鉴别和含量测定方法,增加水分、总灰分、酸不溶性灰分检查项。撰写大蒜质量标准(草案)及起草说明。4.采用微乳薄层鉴别大蒜中氨基酸,并用于大蒜二维薄层。结果:1.大蒜氨基酸类和含硫化合物类物质群TLC指纹图谱的条件分别为正丁醇:冰醋酸:水=4:1:1和甲苯:乙酸乙酯=10:3,各化合物群得到有效分离。但各种数学方法对特征成分提取后未能有效分类。2.大蒜氨基酸类化合物采用异硫氰酸苯酯衍生化,18种氨基酸均达到有效分离;含硫化合物类物质在1%甲酸-甲醇梯度洗脱条件下获得10个有效分离色谱峰;各种数学方法提取数据进行分析,氨基酸类物质群夜相指纹图谱的数学表达未能将大蒜和其它葱属植物有效区分,但含硫化合物类物质群液相指纹图谱的数学表达可有效区分大蒜和其它葱属植物,且数值分类数学模型可以用于大蒜品质优劣的比较。3.分别以潜在大蒜辣素、蒜氨酸和精氨酸为指标成分建立了质量标准中薄层鉴别和含量测定方法;建立水分测定方法,规定含水量不超过65.0%;规定以干重计算,蒜氨酸、精氨酸、大蒜辣素含量分别不少于1.5%、1.0%、0.60%。4.大蒜微乳薄层鉴别最佳条件为20%SDS-正丁醇–正己烷(3.0g-17.3ml-3.0ml)-水微乳液展开系统;大蒜二维薄层鉴别以有机展开剂-微乳展开剂展开方式,各成分得到有效分离。结论:1.针对大蒜富含硫化物物质成分及具有特殊酶体系的特点,根据国内外研究现状,将酶灭活的氨基酸系统和酶激活的含硫化合物系统作为研究的活性物质群是合理的。建立的薄层和液相色谱条件可以分离大蒜中的氨基酸类物质和含硫化合物类物质,指纹图谱的建立和方法学验证符合指导原则。2.采用常用的几种数学模式对指纹图谱共有信息进行提取和表达,发现不同产地大蒜的氨基酸类物质群有高度相似性,且与同属植物也有一定相似性,但采用氨基酸类物质群的指纹特征不足以对大蒜进行区分。3.特征性蒜酶参与反应后产生的含硫化合物指纹图谱可以有效区分大蒜与其它葱属植物,甚至可以区分不同产地的大蒜,并可用于品质优劣的评价,有效区分大蒜与其它种植物应采用大蒜酶激活系统中含硫化合物的HPLC指纹特征。4.若要对氨基酸类物质群指纹图谱进行有效区分,应该提取指纹图谱中的差异特征信息,采用适当的数学模型或建立可行的数学模型对差异性信息进行提取和数字化表达。5.本研究中建立的大蒜药材质量标准与国际接轨,可以为中国药典中大蒜质量标准修订提供依据和参考。
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