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车前子为多年生草本车前科植物车前Plantago asiatica L或平车前P.depressaWilld.的干燥成熟种子。车前子的记载始见于《诗经》,药用最早载于《神农本草经》被列为上品药材,性寒,味甘,具有清热利尿通淋、渗湿止渴、明目、祛痰的功效,用于热淋涩痛、水肿胀满、暑湿泄泻、目赤肿痛、痰热咳嗽等症状的治疗,是《中国药典》(2015版)收藏的常用中药。车前子中的化学成分主要有多糖类、苯乙醇苷、环烯醚萜、生物碱、黄酮、三萜及甾醇类等。 现代研究发现,车前子药材及其复方多用于治疗高血压、糖尿病和水肿等,具有良好的药用价值,得到了国内外的广泛关注。本课题组前期研究表明车前子治疗糖尿病和高血压症方面的主要活性成分为苯乙醇苷类、环烯醚萜类和胍类生物碱类。为进一步开发出有效成分明确、活性成分含量高、质量稳定可控的车前子降糖新药,本论文主要以化学手段结合色谱波谱技术对车前子降糖有效部位的制备工艺以及化学成分进行研究,为车前子新药开发奠定基础。主要内容如下: 1.车前子降糖有效部位的制备工艺研究 以京尼平苷酸、麦角甾苷、异麦角甾苷和车前素A作为车前子降糖活性的有效组分的指标成分,基于回流提取法考察提取溶剂、粉碎度、料液比、浸泡时间、提取时间和提取次数等提取工艺参数,从而确定最佳提取工艺。最终确定的最佳提取工艺为:提取溶剂为70%乙醇,粉碎度为粗粉,料液比为1∶12、提取两次,第一次3h第二次2h。 以车前子降糖部位有效成分的静态吸附率与解吸附率为指标考察了8种大孔树脂对车前子提取液的分离纯化效果。结果显示XAD-8型大孔树脂对各指标成分具有良好的吸附和解吸附效果,是纯化车前子降糖部位有效成分的最佳树脂,并考察了该树脂柱的填装、上样浓度、最大上样量、水洗体积洗脱溶剂和用量等纯化工艺指标,最后确定的最佳纯化工艺为:上样浓度为0.5 g生药/mL、最大上样量为7 BV、水洗体积为4 BV、洗脱溶剂为乙醇水溶液、洗脱溶剂用量为4 BV。 根据以上研究,得到的车前子降糖有效部位的制备工艺进行了两次工艺中试放大试验。中试结果显示该工艺具有较好的稳定性和重复性,并且能够富集到纯度大于50%的有效部位,具有较强的可行性。 2.车前子降糖有效部位的化学成分研究 应用硅胶、ODS、Sephadex LH-20柱层析,中压制备液相、半制备液相等色谱技术对车前子降糖有效部位进行系统的化学成分研究,并根据化合物的理化性质结合波谱技术鉴定了19个化合物,包括三个苯乙醇类、五个环烯醚萜类、四个胍类、一个苯丙素类和六个其它糖苷类。其中化合物1、2、3、4、6、8、11、12、15、16、17、18和19是首次从车前科中分离得到。