犬流感是由犬流感病毒(Canine Influenza Virus，CIV)引起犬以体温升高、咳嗽、流鼻液、食欲减退、呼吸困难为主要特征的疾病。犬作为伴侣动物携带流感病毒，在病原学、生态学及流行病学中占有举足轻重的作用，具有重要的公共卫生学意义。鉴于犬流感病毒可以跨种和种内传播，以及危害犬的健康。因此，建立CIV快速检测技术，将对犬流感的监测与防控发挥重要作用。为此，本研究建立犬流感病毒的环介导等温扩增(LAMP)快速检测方法，同时建立与犬瘟热病毒(CDV)、犬细小病毒(CPV)的多重PCR检测方法。　　 研究如下：　　 1.根据Genbank已发表的犬流感病毒(CⅣ)相对保守的M片段设计合成1对特异性PCR鉴定引物(上游引物CIV-F和下游引物CW-R)，以标准犬流感病毒为模板，用RT-PCR的方法扩增出长度为1027bp特异性片断，将其克隆到pMD-18T载体上，重组质粒经PCR鉴定为阳性。利用PrimerExplorer V4 LAMP专业设计软件(https://primerexplorer.jp/lamp4.0.0/index.html)，设计两对特异性引物F3/B3，FIP/BIP，以及一对环引物LoopF/LoopB，建立CIV的RT-LAMP检测方法，重点对反应体系中的MgS04、Betaine、温度等分别进行优化，并进行敏感性和特异性试验。CIV的LAMP检测结果通过琼脂糖凝胶电泳、颜色变化来判定。结果表明：所建立的反应体系在恒温水浴锅中作用45min即可得到其特有的阶梯状条带，而且对犬细小病毒、犬瘟热病毒和犬副流感病毒的扩增结果均为阴性。该方法对CIV的最小检测限为10-5，灵敏性高于普通RT-PCR方法。通过对CIV人工感染犬的40份肺脏组织样品，应用RT-LAMP和常规RT-PCR方法检测，结果表明：RT-LAMP方法的敏感性要明显高于RT-PCR方法。该方法为犬流感病毒的临床检测提供了一种简便、实用的方法，同时也可以满足基层检疫的需要。　　 2.在对犬临床疾病的研究表明，犬细小病毒、犬流感病毒和犬瘟热疾病常表现相似的临床症状，并出现混合感染或继发感染。签于此，本研究建立了CDV-CPV-CIV多重PCR的检测方法。在通过对单项PCR条件优化的基础上，对CDV-CPV-CIV多重PCR的引物浓度、共同的退火温度等进行了优化，而且对此进行了敏感性、特异性实验。结果显示：该诊断方法敏感性高，CDV、CPV在多重PCR反应中的敏感度达到lOOpg，CIV最低检测量达到了10pg；特异性强，能够特异地检测出相应的病毒，为研制成分子生物学诊断试剂盒奠定了良好的基础。