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目的: 多器官功能障碍综合征(MODS)是脓毒症患者死亡的共同通路,失控的全身炎症反应是最重要的发病机制,大量的免疫细胞及细胞因子参与了脓毒症患者的发病过程,单核细胞亚型在脓毒症及其导致的多器官功能损伤的发病过程中起到了重要作用,为明确单核细胞亚型与脓毒症多器官功能损伤的关系,通过动物研究及临床研究,进一步阐明脓毒症的炎症反应机制。 方法: (1)动物模型的制备:参照鼠类盲肠结扎穿孔(CLP)模型造模并对模型进行评估;获得不同组别造模小鼠和假手术小鼠外周血液及各个内脏器官。 (2)模型成功后收集不同组别小鼠外周血;流式细胞术检测各组小鼠单核细胞亚型,评估不同时间节点单核细胞各个亚型的变化。 (3)HE染色评价小鼠肝、肺、肾、心脏在脓毒症模型中的病理改变。 (4)免疫组化定量测定造模后不同组别的小鼠肾脏白介素-6及肿瘤坏死因子-α表达变化。 (5)临床研究:研究对象来自 2017 年2 月-2018 年2月三峡大学人民医院ICU收治的脓毒症患者,与同期本院健康体检20例为对照组,流式细胞术测定外周血单核细胞亚型变化,检测脓毒症患者中单核细胞亚型在病程中的变化规律。 结果: (1)成功建立盲肠结扎穿孔脓毒症小鼠模型。 (2)取小鼠各个脏器进行HE染色后行组织病理学评分提示,脓毒症小鼠肺、肝、肾脏组织都出现病理损伤改变,肺脏在脓毒症中最先发生损伤,其次是肾脏和肝脏,各个器官组织结构破坏都随时间延长进行性加重,脓毒症小鼠心肌损伤在48 h内不明显。 (3)免疫组化提示脓毒症小鼠肾组织中炎症因子IL-6、TNF-α含量明显升高,IL-6升高较TNF-α升高更快。 (4)流式细胞术提示:小鼠感染脓毒症后单核细胞迅速增高,Ly6Chi 单核细胞先升高,百分比在12 h达到峰值,绝对计数在6 h达到峰值后呈现下降趋势。Ly6Clow单核细胞随病情进展先下降,百分比及绝对计数都在12 h达到最低,之后逐步升高。 (5)取人外周血行流式细胞术示:脓毒症患者在病程中总单核细胞计数在第3天达峰值,随后呈现下降趋势,到第7天再次升高。中间型M2单核细胞随时间变化无差异(P>0.05)。但CD16+单核细胞即M2与M3 计数和在第一天达到峰值。 (6)流式细胞术示脓毒症患者病程中出现新单核细胞亚型 CD14lowCD16?,较对照组具有统计学差异(P<0.001),并于第3天达到峰值,随后逐渐降低。 结论: 单核细胞亚型变化与脓毒症器官功能损伤有关,脓毒症患者病程中出现单核细胞新亚型。