猪圆环病毒3型（Porcine Circovirus Type 3,PCV3）是一种新的猪圆环病毒,于2016年在美国猪群中首次发现该病毒。随后,在亚洲、欧洲和美洲的多个国家报道了PCV3单独或混合感染的病例。PCV3与母猪繁殖障碍、呼吸系统疾病、多系统炎症以及仔猪先天性震颤等临床疾病相关。自2017年以来,我国多个省市及地区均检测到PCV3的存在,呈现广泛的分布及流行,对我国养猪业存在潜在威胁,目前尚无商品化疫苗预防该病,因此,需要进一步研究其流行病学和在临床疾病可能发挥着潜在的作用,以及亟待研发PCV3疫苗。为调查PCV3在我国广东地区猪群中的流行情况,本研究采集了2017～2018年间广东地区72家猪场307份组织样品,其中122份组织样品来自先天性震颤仔猪群,185份来自腹泻仔猪组织。通过PCR对PCV3进行检测,结果显示,PCV3的样品阳性率为31.6%,猪场的阳性率为43.1%,先天性震颤仔猪群中PCV3阳性率为58.2%,仔猪腹泻组织PCV3阳性率为19.5%。先天性震颤仔猪群中PCV3存在与其他病原混合感染,其中与APPV共感染率达51.6%,与PRRSV和PRV的共感染率仅为4.9%和4.1%,与PEDV的共感染率为7.4%。对PCV3阳性样品进行全基因组扩增、测序以及遗传进化分析,共获得38株PCV3全基因组序列,其全基因组序列之间的核苷酸相似性为99.0%～100%,与国内外其他毒株的相似性为98.8%～100%。以PCV3 Cap基因的核苷酸序列构建遗传进化树,结果显示遗传进化树主要分为a和b两个进化分支,其中本研究所获得的36株毒株位于PCV3-a分支,2株位于PCV3-b。本研究所获得的PCV3优势流行毒株主要属于PCV3-a分支,并且在广东猪群中具有遗传多样性。本研究通过PCR扩增Cap基因,其克隆至p ET-28a原核表达载体,并转化到BL21（DE3）表达菌,经IPTG诱导后成功表达,经Ni柱纯化获得PCV3 Cap蛋白。以Cap蛋白作为包被抗原,建立了PCV3抗体的间接ELISA检测方法。确定抗原以2.0μg/m L在4℃条件下包被过夜,2%脱脂乳37℃封闭30min,血清稀释度1:200,37℃反应30min;二抗1:40000稀释,37℃反应30min,底物反应10min,然后用2M H2SO4终止反应作为ELISA最佳反应条件。待检血清OD450nm≥0.239时判定为PCV3阳性,待检血清OD450nm≤0.213时判定为PCV3阴性。本研究建立的ELISA检测方法具有良好的特异性和灵敏度。本研究中通过反向遗传技术将PCV3的Cap基因插入到PRRSV疫苗毒株JXA1-R的ORF1b与ORF2a之间,并成功拯救出重组PRRSV病毒并命名为r JXA1-Cap。利用Cap多克隆抗体进行IFA检测,结果显示r JXA1-Cap成功表达Cap蛋白,生长曲线结果显示所拯救出来的重组病毒与亲本病毒具有相似的生长动力学,表明表达PCV3 Cap基因PRRSV重组毒株构建成功。此外,用1×105TCID50/m L的r JXA1-Cap通过肌肉注射免疫35日龄的仔猪两次,能诱导机体产生免疫应答,不仅能够产生高水平的与亲本疫苗相似的PRRSV N蛋白抗体,而且能够产生抗PCV3 Cap的抗体,抗体在初次免疫猪体7天后即可产生,在免疫后28天抗体水平达到峰值。结果表明,r JXA1-Cap为PCV3的防控提供参考价值。