水蛭是环节动物中重要的类群之一,其具有的许多特征对重建环节动物的起源及进化意义重大。近年来,线粒体基因组序列及其结构在动物系统学研究中已得到越来越多的应用,但关于无吻蛭目的系统发生位置无论是基于形态还是分子证据的意见之间都始终存有争议。相信更多蛭类线粒体基因组(Mitochondrial genome, mt genome)的测定可以为水蛭系统发生关系的重建提供更多有用信息,对明确水蛭的进化关系也会提供更多线索。本研究中测定分析了无吻蛭目Arhynchobdellida中两个亚目三个科五个代表性物种的完整的线粒体基因组序列。这五种水蛭分别为医蛭形亚目(Hirudiniformes, Caballero,1952)中的医蛭科日本医蛭Hirudo nipponia、菲牛蛭Hirudinaria manillensis,黄蛭科的尖细金线蛭Whitmania acranulatas光润金线蛭Whitmania laevis,石蛭形亚目(Erpobdelliformes, Sawyer,1986)的八目石蛭Erpobdella octoculata。结合已报道的相关线粒体基因组分子信息,通过最大简约法(Maximum parsimony)、最大似然法(Maximum纯化柱12000rpm离心1min,除去残留的洗脱液；(8)将纯化柱在室温下放置片刻,以挥去残留的酒精；(9)将纯化柱置于干净的Ep管中,在DNA制备膜中央加25～粒体蛋白编码基因在解决有环带纲动物系统发生关系方面的有效性。通过测定,得到无吻蛭目五种水蛭线粒体基因组,其中日本医蛭14414bp、菲牛蛭14473bp、尖细金线蛭14462bp、光润金线蛭14432bp、八目石蛭14407bp,均为闭合环状分子,包括37个基因(13个PCGs、22个tRNA基因、2个rRNA基因)和1个主要的非编码区(控制区)。五个物种的线粒体基因组的基因结构、顺序、方向与原始冠轮动物的相同,这似乎显示水蛭的线粒体基因组结构比较原始。五种水蛭线粒体蛋白编码基因中,除少数基因使用GTG和ACG作为起始密码子外,其他所有基因都以ATN作为起始密码子；除Cytb、atp6、nad3、nad4L和nad5外,其他所有基因均以完整的TAA作为终止密码子。5种蛭类的tRNA-Gly (TCC)的二级结构出现TΨC臂缺失,而tRNA-Ser2(TCT)中其可变环向外延长形成一个6bp的额外臂,这在后生动物中比较罕见。五个物种的线粒体基因组序列中存在A+T含量偏向性,其中控制区的A+T含量最高,这符合后生动物mtDNA控制区碱基组成偏向性的特征。系统发生分析结果显示：1)蛭类是寡毛类的姐妹群,而多毛类的则是有环节动物中最原始的类群；2)根据本研究所构建的MP树、ML树和BI树显示无吻蛭目6个物种之间的关系为((尖细金线蛭+光润金线蛭)+(菲牛蛭+八目石蛭))+宽体金线蛭+日本医蛭,这从基因组水平证明了医蛭科、黄蛭科为并系群。对于石蛭科,因为分类单元数量较少的原因,这一结果可能需要更多物种信息以便更深入探讨；3)本研究中基于12个蛋白编码基因构建的系统树结果同上,这似乎表明atp6对系统树的构建影响有限。