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研究背景银屑病是一种常见的自身免疫性、慢性炎症性疾病,临床上主要以红斑、鳞屑性斑块为常见表现,病理特征为表皮角化过度、角质形成细胞增生及炎症细胞浸润,其与炎细胞被激活后分泌的一系列细胞因子相关。研究认为,银屑病发病与固有免疫、适应免疫均有关,角质形成细胞、树突状细胞、Th17细胞、NKT细胞、γδT细胞等均参与银屑病的发病。那么,上述细胞是如何参与银屑病发病的呢?首先DCs被各种因素激活后分泌IL-23、TNF-α、IL-1β促进γδT细胞、Th1细胞、Th17细胞、CD8+T细胞活化,随后激活的细胞分泌IL-17、IL-22等,这些细胞因子分别与角质形成细胞胞膜上的IL-17受体、IL-22受体结合,刺激角质形成细胞增殖、分化并分泌一些趋化因子、抗菌肽,如CC趋化因子配体20(CCL20)和CXCL1,3,8-11,分泌的趋化因子可募集更多的γδT细胞、中性粒细胞、Th17细胞、CD8+T细胞进入皮肤,形成一正向反馈环介导银屑病的发生发展。根据前期文献整理,我们知道银屑病发病与CCL20/CCR6上调有关。在银屑病病程中,角质形成细胞分泌的CCL20诱导CCR6+T细胞浸润皮肤并分泌相关炎症因子促进角质形成细胞进一步增殖分化,因此,CCL20是维持银屑病炎症中正反馈环的关键分子。课题组前期研究发现,小鼠银屑病样皮炎与Vγ4+T淋巴细胞在皮肤中的浸润相关。而Vγ4+T淋巴细胞表达CCR6,其迁移可能受到了CCL20的调控,因此我们课题组希望借此明确是否CCL20/CCR6通过诱导Vγ4+T淋巴细胞趋化调控小鼠银屑病样皮炎,并希望通过抑制CCL20的释放,减轻咪喹莫特诱导的银屑病样皮炎。第一部分:抑制CCL20对小鼠银屑病模型的影响研究研究目的:注射鼠抗CCL20/MIP-3α抗体抑制小鼠体内CCL20趋化因子后,利用咪喹莫特(Imiquimod,IMQ)乳膏在C57BL/6小鼠体内构建银屑病样皮炎模型,观察抑制CCL20后小鼠银屑病样皮炎的炎症情况。研究方法:将12只雌性C57BL/6小鼠背部皮肤脱毛后分成2组:实验组和对照组,每组6只。其中实验组小鼠注射CCL20抗体,对照组小鼠注射同等体积PBS溶液,使用咪喹莫特(IMQ)乳膏构建小鼠银屑病样皮炎模型,观察各组小鼠银屑病样皮炎红斑、鳞屑评分变化,并于造模第7天处死小鼠并取材,通过苏木素-伊红(HE)染色、免疫组化染色及流式细胞学检测分析小鼠银屑病模型相关指标的变化。结果:相较于与对照组,实验组小鼠红斑及鳞屑评分明显降低。HE染色结果显示,实验组小鼠表皮厚度变薄、表皮细胞异常增殖及分化减轻、新生血管减少(P<0.05)。流式细胞学检测结果显示,相较于对照组,实验组小鼠表皮γδT淋巴细胞(主要为Vγ4+T淋巴细胞)百分比、IL-17A+T淋巴细胞百分比明显降低(P<0.05)。免疫组化结果显示,相较于对照组,实验组小鼠造模区皮肤炎症因子白细胞介素(IL)-17A、γ干扰素(IFN-γ)、CXCL8及IL-23表达水平均降低。结论:抑制小鼠体内CCL20趋化因子可减少Vγ4+T淋巴细胞浸润及炎症因子的分泌,从而减轻小鼠银屑病样皮炎。第二部分:微针药物递送抑制CCL20和改善小鼠银屑病样皮炎的研究研究目的:在银屑病药物外用治疗中存在着诸多瓶颈,比如透皮吸收困难、副作用大等问题。因此,本研究旨在使用一种改良的负载瑞香素的可溶性透明质酸微针以提高药物对于银屑病治疗的效果。研究方法:将15只小鼠随机分为5组:对照组(Normal)、咪喹莫特组(IMQ)、瑞香素组(Daph)、微针组(Vehicle)、微针+瑞香素组(Vehicle+Daph)。除对照组外的其他组小鼠每天在上述背部皮肤准备区涂用咪喹莫特乳膏62.5mg。对于瑞香素组,在造模区粘贴含有0.1 mg瑞香素的纱布,隔日更换一次。微针组和微针+瑞香素组隔日分别用含瑞香素和不含瑞香素的贴片。每隔一天拍摄小鼠背部造模区,第7天处死小鼠进行检测。在体外实验,使用Ha Ca T细胞作为靶细胞,用咪喹莫特溶液诱导体外炎症模型。之后加入瑞香素检测其对于Ha Ca T细胞分泌的炎症因子的调控作用。结果:负载瑞香素微针治疗小鼠银屑病样皮炎后,其皮炎症状明显减轻,角质形成细胞异常增殖和炎症因子分泌明显减少。在体外,瑞香素还可以抑制NF-κB信号通路,从而抑制Ha Ca T细胞的增殖和炎症因子的释放,尤其是CCL20。结论:改良的微针载瑞香素可使银屑病经皮给药更有效,更好地改善小鼠银屑病样皮炎。瑞香素给药的新途径为银屑病的治疗提供了新的研究方向。