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细胞凋亡已成为世界生命科学领域的研究热点,其重要意义在于有可能阐明多种疾病包括病毒感染、神经退化性疾病、免疫缺陷和恶性肿瘤的发病机理,并为这些疾病治疗探索新的方法。最近,有学者重点阐述了细胞凋亡与临床疾病的关系,细胞凋亡的分子机制和实验室检测在细胞凋亡评估过程中的重要作用。由此可知,研究细胞凋亡的实验室检测体系非常重要,同时,其检测方法不断涌现,分析手段日趋完善和成熟。按方法学可分为形态学、生物化学、免疫化学和分子生物学测定法。也可将其分为以下七类,即(1)形态学检测;(2)流式细胞分析;(3)DNA降解分析;(4)凋亡细胞膜改变分析;(5)细胞凋亡相关蛋白分析;(6)细胞凋亡酶学分析;(7)其它细胞凋亡检测法。目前检测DNA降解的方法主要有电泳、流式细胞分析、原位末端标记(TUNEL)和PCR法等。我们欲利用α32磷脱氧三磷酸胞苷(α32P dCTP)与双脱氧三磷酸胞苷(ddCTP)在外源性终末核苷酸转移酶(TdT)的催化作用下,对同一DNA样本的3’-羟基末端进行饱和标记,建立定量DNA末端最大标记量(Lmax)的方法(TdT法),并将Lmax与流式细胞分析(FCA)等检测结果进行比较。同时,利用DNA末端定量技术检测不同年龄高血压大鼠(SHR)心肌细胞凋亡的动力学关系,并通过其探讨雷米普利治疗SHR,研究ACE抑制剂对心肌细胞凋亡的影响。在DNA末端定量应用于细胞凋亡检测中的研究中,我们以P2z受体的激活剂如三磷酸腺苷(ATP)、苯甲酰苯甲酸ATP(BzATP)等,或抑制剂如氧化型ATP(OxATP)作用于P2z(+)与P2z(-)CLL细胞,采用TdT法以及电镜、DNA凝胶电泳检测细胞凋亡,观察P2z受体介导CLL细胞凋亡中的作用。同时,探讨影响P2z受体介导CLL细胞凋亡的各种影响因素,包括各种二价阳离子、EDTA或EGTA、温度及在胆碱介质中的P2z(+)CLL细胞经ATP或BzATP诱导凋亡的激活或抑制效应及其可能机理。本研究共分四部分,包括第一部分DNA末端定量检测方法的建立;第二部分DNA末端定量在雷米普利抑制自发性高血压大鼠细胞凋亡中的应用;第三部分DNA末端定量在P2z受体诱导淋巴细胞白血病细胞凋亡中的应用;第四部分DNA末端定量在P2z受体介导淋巴细胞白血病细胞凋亡机理研究中的应用。