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冬虫夏草由千尸毛“虫”及其头部生长出来的真菌“草”两部分组成。冬虫夏草有调节免疫系统功能、抗肿瘤、抗疲劳等多种功效。许多公司培育冬虫夏草,以满足市场对濒临灭绝的天然虫草的需求。冬虫夏草的主要活性成分为虫草多糖。因多糖成分复杂,其结构与生物活性关系的研宄较少。虫草多糖的生物合成取决于特定生长环境下基因与蛋白的综合表达状况。据报道.在不同的培养基中,虫草菌表达不一样的基因组:成分分析发现.野生和人工虫草的水溶性组分不同t虫草菌基因组表达与组分的不同进一步扩大了非模板式的多糖生物合成的多样性,从而造成天然虫草的多糖结构特殊,也正是如此虫草多糖的生物功能难以在人工培育中复制。因此,建立天然虫草多糖的结构与功能关系,进而模拟天然虫草多糖的生物合成是人工培育虫草亟需解决的重大科学问题之一。论文首先对得到的28种天然虫草粗多糖、18种天然虫草纯化多糖、72种人工虫草粗多糖和46种人工虫草纯化多糖进行基本理化性质、活性和结构研究。基本理化性质显示:不同提取方法得到的天然和人工虫草多糖具有不同的分子量、总糖和蛋白含量:醋酸纤维素电泳分析显示虫草多糖中可能有酸性多糖:元素分析结果表明虫草多糖中含硫:天然和人工虫草多糖的主要三种单糖是甘露糖、葡萄糖及半乳糖,但每种单糖的比例在多糖中各不相同。活性研究表明:在测试的164种多糖中,只有5种多糖(两种是九寨沟来源的碱提野生虫草多糖,三种是蛹虫草的酶提组分)浓度为100u g/ml时在H1229上呈现29-38°/。的细胞毒活性;只有部分野生虫草纯化的多糖在BaF3FRlc细胞系中可以促进FGF/FGFR/硫酸多糖信号传导引起的细胞增殖,此结果提示野生虫草含硫酸多糖,这与虫草多糖的元素分析结果一致。为模拟天然虫草多糖的生物合成,我们假设虫体内的盐环境可能会使蛹虫草菌合成与野生虫草具有相类似结构和功能的多糖。我们发现蛹虫草培养基中盐浓度(硫酸钠或氯化钠)与纯化了的多糖抗血管生成活性成正相关。对抗血管生成机理的研究表明,多糖是通过降低VEGF单聚体和二聚体的表达水平、抑制内皮细胞的转移来达到抗血管生成目的。13C-NMR结构研宂表明:空白组和盐添加组的人工虫草多糖的a和3糖苷键比例不同,提示盐引起了多糖结构的巨大变化;同时,加盐培养得到的虫草多糖在糖醛酸区域出现信号‘新建立的稳定同位素还原糖醛酸方法确定了虫草多糖的糖醛酸为半乳糖醛酸。通过LC-MS联用方法,我们首次证明了半乳糖醛酸以聚半乳糖醛酸的形式存在‘通过寡糖的ESI-MS分析,发现虫草多糖中聚半乳糖醛酸可被甲基和乙酰基修饰。此外.联合新建立了34S?硫酸盐的同位素培养标记方法,苯胺和D5-苯胺标记方法及LC-MS分析技术,我们发现虫草多糖含共价硫酸根,因而首次证明陆地真菌多糖可被磺酸化。我们的研宄结果对如何人工培育冬虫夏草及如何评价功效关系具指导意义。