【摘 要】
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目的:骨质疏松症（Osteoporosis,OP）是一种以骨量的减少以及骨组织的微结构破坏,可导致骨脆性增加及易于骨折的代谢性骨病。其主要原因是过量的骨吸收超过成骨细胞的骨形成从而导致骨质疏松。既往研究表明lnc RNA与破骨细胞形成密切相关,本研究主要探索Lnc RNA-ANCR在破骨细胞分化过程中的作用及其可能的机制,为研究破骨细胞的形成以及分化机制提供可能的理论依据,为治疗骨质疏松症提供新的
【基金项目】
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山东省自然科学基金（ZR2019MH087）； 济宁医学院教师科研扶持基金（JYFC2018FKJ067）；
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目的:骨质疏松症（Osteoporosis,OP）是一种以骨量的减少以及骨组织的微结构破坏,可导致骨脆性增加及易于骨折的代谢性骨病。其主要原因是过量的骨吸收超过成骨细胞的骨形成从而导致骨质疏松。既往研究表明lnc RNA与破骨细胞形成密切相关,本研究主要探索Lnc RNA-ANCR在破骨细胞分化过程中的作用及其可能的机制,为研究破骨细胞的形成以及分化机制提供可能的理论依据,为治疗骨质疏松症提供新的靶点和理论依据。方法:提取C57BL/6小鼠骨髓原代细胞在刺激因子M-CSF刺激下诱导巨噬细胞以及巨噬细胞经M-CSF及RANKL联合刺激向破骨细胞诱导分化。使用鬼笔环肽、TRAP染色及TRAP酶活性检测对破骨细胞进行验证。原位杂交技术检测比较骨髓源巨噬细胞向破骨细胞分化过程中ANCR表达。本研究同时比较骨髓源巨噬细胞及巨噬细胞株RAW264.7细胞在M-CSF和RANKL刺激下发生破骨细胞分化的差异。构建ANCR过表达慢病毒,探究ANCR过表达慢病毒对RAW264.7细胞向破骨细胞分化的影响,病毒的浓度为1×109TU/ml,过表达ANCR慢病毒及阴性慢病毒分别感染RAW264.7细胞,得到稳定转染后细胞进行诱导培养,并使用荧光定量PCR验证ANCR转染效率。将RAW264.7细胞随机分为4组:对照组、诱导组、诱导+慢病毒ANCR组、诱导+阴性慢病毒组。除对照组外,其余3组细胞均用含50ng/ml的M-CSF和100ng/ml的RANKL的α-MEM完全培养基进行诱导,对照组给予α-MEM完全培养基进行培养,持续6天。鬼笔环肽染色观察是否出现破骨细胞及破骨细胞阳性细胞数与总细胞数比值。使用SPSS、Image J软件进行测量统计、Graphpad Prism7.0进行数据作图。结果:原代的骨髓源巨噬细胞和巨噬细胞株RAW264.7细胞使用50ng/ml的M-CSF和100ng/ml RANKL的α-MEM完全培养基诱导培养可诱导出破骨细胞,但RAW264.7细胞具有更易诱导为破骨细胞的特性。原位杂交数据显示,随着诱导时间的延长,ANCR的表达量下降,并在第6天达到最低水平,差异具有统计学意义（P<0.05）。荧光定量PCR结果显示:与对照组相比,ANCR过表达慢病毒组、阴性慢病毒组ANCR的表达无明显差异（P>0.05）。诱导组、ANCR过表达慢病毒+诱导组、阴性慢病毒+诱导组3组之间破骨细胞阳性率无明显差异,差异不具有统计学意义（P>0.05）。结论:骨髓源巨噬细胞及RAW264.7细胞可经M-CSF+RANKL刺激成功诱导为破骨细胞。ANCR可能在破骨细胞分化过程中起负调控作用,这为预防和治疗骨质疏松的发生、发展提供新方向。
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