产鼠李糖脂菌株的筛选及降解原油能力的分析

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铜绿假单胞菌分泌的鼠李糖脂生物表面活性剂能够广泛应用于工业中,尤其是处理石油烃等有机物的污染。本论文从实验室保存菌株和环境样品中筛选出高产鼠李糖脂的菌株并分析菌株降解原油的能力。采用CTAB-亚甲基蓝筛选平板从实验室保存菌株、环境样品、原油样品和油污土壤样品中分离产鼠李糖脂菌株,即选择菌落周围具有深蓝色晕圈的菌株。初步发酵后采用蒽酮硫酸法分析各菌株的鼠李糖脂产量,共筛选得到13株鼠李糖脂产量较高的菌株,其产量为10.3-18.9 g/L。从原油样品中,筛选到菌株D1,鼠李糖脂产量为9.5 g/L。从原油污染土壤样品中,筛选到E1,鼠李糖脂产量为4.2 g/L。对13株高产鼠李糖脂菌株、D1和E1进行生理生化实验及16S rRNA分子生物学鉴定,15株细菌的16SrRNA基因序列与铜绿假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa)的同源性最高,为99%-100%,鉴定筛选菌株均为铜绿假单胞菌。对15株筛选菌株产鼠李糖脂摇瓶水平进行发酵分析,结果显示大部分菌株以菜籽油为碳源时鼠李糖脂产量普遍高于甘油为碳源时的鼠李糖脂产量。对菌株A487进行不同菜籽油浓度和NaN03浓度发酵的对比,当1 L培养基加入50 g菜籽油时鼠李糖脂产量比初始提高了 23.4%,NaN03浓度为8 g/L时鼠李糖脂产量比初始浓度下提高了 16.1%。.然后对不同温度发酵进行对比,结果证明37℃发酵时分泌鼠李糖脂最高,比35℃发酵时鼠李糖脂产量提高了 23.5%,比40℃发酵时产量提高了 17.0%。分别分析了菌株P.aeruginosa D1和P.aeruginosa E1利用非水溶性碳氢化合物生长的能力。菌株D1能够利用原油、柴油为唯一碳源生长,培养物中生物量分别增加了 33.9倍和39.2倍,生物量分别达到了 4.7×109和4.0×109 cfu/mL,菌株E1能够利用原油为唯一碳源生长,生物量增加了 14.1倍,生物量达到了 2.7×108cfu/mL。进一步分析了菌株D1降解原油的效率。将菌株接种到原油为唯一碳源的培养基中,以培养基补充0.5 g/L甘油为对比。经过10 d的培养,发现没有甘油的培养基中,每升培养基原油质量从0.78 g下降到0.50 g;而补充甘油的培养基中,每升培养基原油质量从0.78 g下降到了 0.22 g。没有甘油的培养基中4 d后生物量达到最高值,为4.8×109cfu/mL,而补充甘油的培养基,培养1d后生物量达到5.7×109cfu/mL,培养4d后生物量为9.2×109cfu/mL,结果显示,补充限量甘油,能够显著提高菌株D1的生物量,从而能够明显提高原油降解的效率。
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