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脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后损伤平面以下的脊髓功能障碍,可导致神经源性膀胱（neurogenic bladder,NB）的发生。NB以尿频、尿急、尿失禁、尿潴留、遗尿等下尿路症状为主要表现。大量基础实验及临床研究证实针灸有促进SCI后膀胱功能重塑、改善排尿障碍与抗泌尿系感染的作用,是治疗和改善NB的重要方法之一。但目前针灸选取的穴位较少能体现中医腧穴配伍和阴阳理论的特点,“相对穴”基于中医“阴阳互根互用”理论选取头颈、躯干、四肢身体各部位阴阳相对的两个腧穴,其阴阳或表里相配,具有取穴少、针对性强的特点,并通过阴阳相济发挥协同增效作用。阴陵泉是足太阴经之合穴,位于后肢内侧,胫骨内侧髁下缘凹陷处,为治疗泌尿系统疾病的要穴,针刺阴陵泉通利三焦以利小便。阳陵泉是足少阳经之合穴,筋之会穴,位于小腿外侧,在腓骨小头前下方凹陷处,主治下肢经筋病症之要穴,附近有坐骨神经分支。研究表明,膀胱逼尿肌平滑肌细胞凋亡增加可能是造成逼尿肌功能减退的原因。内质网应激（endoplasmic reticulum stress,ERS）是继死亡受体活化、线粒体损伤途径后第三大凋亡途径。葡萄糖调节蛋白-78（glucose regulated protein 78,GRP78）、激活转录因子4（activating transcription factor 4,ATF4）、半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-12（cysteinyl aspartate specific proteinase 12,Caspase-12）是内质网应激的主要因子。本实验选择经典改良Allen’s法,制备脊椎T10节段大鼠脊髓损伤后神经源性膀胱模型,在损伤后早期即采取电针和艾灸两种干预治疗方法,选取阴陵泉-阳陵泉的“相对穴”组、阴陵泉组、阳陵泉组、阴陵泉-阳陵泉旁开组,与假手术组、模型组比较观察大鼠BBB（Basso,Beattie and Bresnahan）评分、膀胱尿流动力学指标、膀胱组织ERS相关蛋白的表达变化,探究脊髓损伤后神经源性膀胱的发生是否与ERS有关,ERS途径是否是电针和艾灸“相对穴”治疗脊髓损伤后神经源性膀胱的作用靶点,探究“相对穴”相比单穴组能否通过阴阳相济发挥协同增效作用,为临床治疗神经源性膀胱提供新的思路,为“相对穴”理论的推广提供依据。目的:通过建立脊椎T10节段脊髓损伤模型大鼠,观察针灸“相对穴”阴陵泉与阳陵泉对骶上脊髓损伤后神经源性膀胱的治疗效应及其在ERS途径介导的膀胱逼尿肌凋亡中发挥的作用。从电针及艾灸两种不同的治疗方法上,分别对单穴、相对穴、非经非穴进行研究,比较其治疗效果不同,进一步阐明了“相对穴”的阴阳相济理论及其对治疗发挥的协同增效作用,从ERS角度阐述了“相对穴”发挥作用的可能机制。方法:80只雌性Wistar大鼠,随机分为假手术组（Sham）8只、造模组72只。造模组采用改良Allen’s法损伤大鼠胸椎T10段脊髓制备神经源性膀胱模型,8只大鼠造模不成功后剔除。将造模成功的大鼠随机分为模型组（SCI）8只、治疗组:电针阴陵泉-阳陵泉组（ZAB）7只、电针阴陵泉组（ZA）7只、电针阳陵泉组（ZB）7只、电针阴陵泉-阳陵泉旁开组（ZCD）7只、艾灸阴陵泉-阳陵泉组（JAB）7只、艾灸阴陵泉组（JA）7只、艾灸阳陵泉组（JB）7只、艾灸阴陵泉-阳陵泉旁开组（JCD）7只。大鼠清醒后2小时予针灸治疗,电针组予电针治疗,强度以大鼠肢体微微颤动而不挣扎为宜,时间20min,每日治疗1次,共干预治疗10次;艾灸组5mg/壮,每次5壮,每壮均以大鼠全身出现挣扎为度,每日治疗1次,共干预治疗10次。假手术组及模型组每天固定抓取5min。第10天治疗结束后2小时,对大鼠行BBB评分、尿流动力学检测,取材后HE染色法观察膀胱组织病理形态学变化,Western blotting 法测定 GRP78、ATF4、Caspase-12 蛋白的相对表达量,qRT-PCR 法测定 GRP78、ATF4、Caspase-12 mRNA的表达。以P＜0.05为差异有统计学意义。结果:1.一般情况大鼠麻醉苏醒后Sham组正常摄食、自由活动,下腹部未触及胀大的膀胱。造模成功的大鼠双下肢拖地爬行,下腹部可触及胀大膀胱,予手法排尿。2只SCI组、1只ZCD组大鼠出现尿路严重感染情况,1只JAB组、1只JCD组大鼠局部皮肤烫伤破损,均予安乐死处理,共剩余67只进行后续实验。2.各组大鼠BBB评分的结果与Sham比较,各治疗组及SCI组大鼠BBB评分明显降低（P＜0.001）。与SCI比较,ZA组、ZCD组、JA组差异无统计学意义（P＞0.05）,ZAB组、ZB组、JAB组、JB组、JCD组BBB评分升高（P＜0.05）。“相对穴”组的BBB评分高于单穴阳陵泉（P＜0.01）,艾灸治疗的BBB评分高于电针治疗（P＜0.001）。3.各组大鼠尿流动力学的比较3.1 膀胱最大容量结果与Sham组比较,除ZAB组外各治疗组及SCI组大鼠膀胱容积明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,各治疗组大鼠膀胱容积均出现下降（P＜0.05）。“相对穴”组的膀胱容积小于单穴阴陵泉（P＜0.001）,电针治疗的膀胱容积小于艾灸治疗（P＜0.001）。3.2 漏尿点压力结果Sham组及各治疗组间无统计学差异（P＞0.05）,与SCI组间有统计学差异（P＜0.05）,SCI组较各组漏尿点压力增高。3.3 膀胱顺应性结果与Sham组比较,除ZAB组外各治疗组及SCI组大鼠膀胱顺应性增高（P＜0.05）。ZAB组、ZA组、JAB组、JA组较SCI组大鼠均可降低膀胱顺应性（P＜0.05）。“相对穴”组的膀胱顺应性较单穴阴陵泉组降低（P＜0.001）,电针治疗的膀胱顺应性小于艾灸治疗（P＜0.05）。4.Western blotting 检测各组大鼠膀胱组织内 GRP78、ATF4、Caspase-12蛋白相对表达量结果4.1 各组大鼠膀胱组织内GRP78蛋白相对表达量结果与Sham组比较,脊髓损伤后膀胱组织内GRP78蛋白相对表达量明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,除ZCD组外,各治疗组均可降低膀胱组织内GRP78的表达（P＜0.05）。ZAB组、ZA组、JAB组、JA组与Sham组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。4.2 各组大鼠膀胱组织内ATF4蛋白相对表达量结果与Sham组比较,除JAB组外脊髓损伤后膀胱组织内ATF4蛋白相对表达量明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,ZAB组、ZA组和艾灸组可降低ATF4的表达（P＜0.05）。4.3 各组大鼠膀胱组织内Caspase-12蛋白相对表达量结果与Sham组比较,除ZAB组、JAB组外脊髓损伤后膀胱组织内Caspase-12蛋白相对表达量明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,除JB组外其他治疗组可降低Caspase-12的表达（P＜0.05）。5.各组大鼠膀胱组织内GRP78、ATF4、Caspase-12的mRNA相对表达量结果5.1 各组大鼠膀胱组织内GRP78的mRNA相对表达量结果与Sham组比较,除ZAB组外脊髓损伤后膀胱组织内GRP78的mRNA相对表达量明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,各治疗组均可降低膀胱组织内GRP78的表达（P＜0.05）。“相对穴”组GRP78的表达较单穴阴陵泉组降低（P＜0.001）,电针治疗组GRP78的表达较艾灸治疗降低（P＜0.001）。5.2 各组大鼠膀胱组织内ATF4的mRNA相对表达量结果与Sham组比较,除JAB组外脊髓损伤后各组膀胱组织内ATF4的mRNA相对表达量明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,ZAB组、ZA组、ZB组、JAB组、JA组、JB组均可降低膀胱组织内ATF4的表达（P＜0.05）。“相对穴”组ATF4的表达较单穴阴陵泉组降低（P＜0.001）,电针治疗与艾灸治疗之间差异没有统计学意义（P＞0.05）。5.3 各组大鼠膀胱组织内Caspase-12的mRNA相对表达量结果与Sham组比较,脊髓损伤后各组膀胱组织内Caspase-12的mRNA相对表达量明显增高（P＜0.05）。与SCI组比较,针灸各组均可降低膀胱组织内Caspase-12的表达（P＜0.05）。“相对穴”组Caspase-12的表达较单穴阴陵泉组降低（P＜0.01）,艾灸治疗组Caspase-12的表达较电针治疗降低（P＜0.05）。6.HE染色观察各组大鼠膀胱组织形态学假手术组大鼠膀胱组织的移行上皮细胞整齐规则,无炎性细胞浸润及组织水肿;肌间隙充满弹性纤维。模型组、阳陵泉组、旁开组大鼠膀胱组织移行上皮细胞排列紊乱,固有层可见较多中性粒细胞等炎症细胞浸润;肌纤维排列层次欠清晰。阴陵泉-阳陵泉组大鼠膀胱的移行上皮细胞层次清楚、连续,固有层轻度水肿,可见少量炎症细胞浸润,肌层排列清晰,弹性纤维填充均一。阴陵泉大鼠膀胱的移行上皮细胞层次欠清楚,固有层轻度水肿,可见少量炎症细胞浸润,肌纤维排列层次欠清晰。结论:1.针灸“相对穴”阴陵泉与阳陵泉较单穴阳陵泉可更好的改善脊髓损伤大鼠的后肢运动功能。2.针灸“相对穴”阴陵泉与阳陵泉较单穴阴陵泉更能减少脊髓损伤后神经源性膀胱大鼠的膀胱最大容积、降低膀胱顺应性、减轻尿潴留。3.脊髓损伤后大鼠出现尿潴留,膀胱组织出现ERS介导的细胞凋亡。针灸“相对穴”阴陵泉与阳陵泉可通过下调ERS中GRP78、ATF4、Caspase-12的表达,减轻膀胱逼尿肌凋亡,从而发挥治疗作用。