骨膜由于含有丰富的营养血管丛具有显著的再生能力。近年来,骨膜中的骨膜细胞（periosteal cells,PCs）在组织工程技术的相关研究中越来越受到关注。颌骨PCs由于在口腔手术中易于获得,使其有望应用于牙周组织工程技术实现牙周组织再生。蛇床子素（osthol,OST）已被证明可以在体内、体外促进骨组织的形成,但其对PCs的作用还有待阐明。目的通过体外分离培养兔颌骨PCs,检测细胞的增殖能力,并通过分析细胞的成骨分化能力、成软骨分化能力以及成脂分化能力,验证兔颌骨PCs的多向分化能力。比较不同浓度OST(0 mol/L、10-8mol/L、10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L)作用下兔颌骨PCs的形态、增殖能力、细胞迁移能力;以及细胞的成骨分化和细胞外基质表达情况,初步探讨OST对兔颌骨PCs的生物学作用。方法1.体外分离培养兔颌骨PCs,采用CCK-8（cell counting kit-8）检测细胞的增殖情况,通过结晶紫染色验证细胞集落形成能力。2.成骨诱导后,通过碱性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP）染色、茜素红染色验证该细胞的成骨分化能力;经成软骨诱导后通过阿尔新蓝染色验证细胞的成软骨分化能力;经成脂诱导后通过油红O染色验证细胞的成脂分化能力。3.通过CCK-8检测不同浓度OST对兔颌骨PCs增殖能力的影响,通过划痕实验验证OST对细胞迁移能力的影响。4.通过Real-time PCR检测OST对颌骨PCs成骨分化相关基因表达的影响。5.通过ALP染色、ALP活性检测试剂盒来检测OST对颌骨PCs ALP表达的影响。6.通过茜素红染色及定量分析检测OST对颌骨PCs矿化结节形成的影响。7.通过Real-time PCR检测OST对颌骨PCs细胞外基质相关基因表达的影响。结果1.成功分离培养兔颌骨PCs,该细胞在体外表现出较好的增殖能力。2.兔颌骨PCs在成骨诱导7 d及21 d分别行ALP及茜素红染色、成软骨诱导21 d进行组织切片行阿尔新蓝染色、成脂诱导15 d进行油红O染色的结果均为阳性,提示所培养的PCs具有成骨、成软骨和成脂三向分化能力。3.OST对兔颌骨PCs的形态无显著影响,对细胞的增殖在早期有一定的促进作用,但对细胞的迁移表现出轻微的抑制作用。4.OST可影响颌骨PCs成骨分化相关基因表达,其中10-7mol/L及10-6mol/L的OST可最有效促进细胞成骨分化基因Runt转录相关因子2（runt-related transcription factor 2,Runx2）、骨桥蛋白（osteopontin,OPN）、ALP及骨钙素（osteocalcin,OCN）的表达。5.ALP检测结果显示OST可促进颌骨PCs ALP的表达,其中10-6mol/L OST的作用最为明显。6.茜素红染色及定量分析显示OST可影响颌骨PCs的体外矿化能力,其中10-6mol/L OST的作用最为明显。7.对I型胶原（collagen type I,Col-I）、整合素β1（integrin beta 1,ITGβ1）、纤连蛋白（fibronectin,FN）、层黏连蛋白（laminin,LA）等细胞外基质相关基因表达检测结果显示,OST可影响颌骨PCs细胞外基质的合成,其中10-7mol/L的OST作用最为明显。结论兔颌骨PCs具有间充质干细胞所具有的成骨、成软骨、成脂分化能力;本实验条件下OST对兔颌骨PCs的增殖及生长无显著影响,但可影响兔颌骨PCs的成骨分化能力及细胞外基质的合成,有望与PCs联合利用牙周组织工程技术实现牙周组织再生。