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目的：本研究采用流式细胞仪检测外周血淋巴细胞中γ-H2AX的表达水平，建立一种快速、高通量检测淋巴细胞γ-H2AX含量的方法，并研究电离辐射对淋巴细胞γ-H2AX含量的影响，建立相应的时间效应曲线与剂量效应曲线，探索该方法用于早期、快速估计电离辐射损伤生物剂量的可能性。方法：采集健康志愿者的外周血，利用γ-H2AX特异性抗体对淋巴细胞进行间接免疫荧光标记，采用流式细胞仪分析淋巴细胞中γ-H2AX的几何平均荧光强度值，并计算出相对荧光强度。比较不同固定液浓度、不同固定时间、不同抗γ-H2AX抗体结合时间、不同抗γ-H2AX抗体结合浓度滴度、不同IgG-FITC抗体浓度等因素对检测结果的影响，优化实验条件；另比较了仪器类型和参数设定对上述两项指标的影响。利用钴-60放射源对外周血细胞进行照射，以相对荧光强度为指标，研究电离辐射对淋巴细胞γ-H2AX含量的影响，建立相应的时间效应曲线与剂量效应曲线并检测正常人本底表达水平，以及对个体间差异进行比较分析。结果：通过实验结果对比，从细胞形态上观察比较，可以发现使用固定液PFA浓度为2%较好，固定30min比固定15min好，且固定时间为30min与固定1h在细胞形态上相比接近；抗γ-H2AX抗体结合时间为30min与抗γ-H2AX抗体结合时间为3h无显著性差异；抗γ-H2AX抗体作用浓度滴度为1:200与1:400相比有显著性差异，与浓度滴度为1:100的抗γ-H2AX抗体相比无显著性差异；IgG-FITC抗体结合浓度滴度为1:200与浓度滴度为1:100的相比无显著性差异。参数设定和仪器类型均可明显影响经60Co γ射线照射后的γ-H2AX几何平均荧光强度，而对相对荧光强度无显著影响。实验结果显示，正常人的本底值平均值为2.10±0.54，最大值是3.13，最小值是1.07，其中，男性与女性的本底值相比无显著性差异；个体间差异在不同剂量（0、2、6Gy）对比下，相对荧光强度差异均较小；时间效应曲线显示，受到照射后便逐渐升高，在30min达到最大值，随后信号便逐渐丢失；通过剂量效应曲线显示，γ-H2AX表达水平呈剂量依赖性，随着剂量的增大而增多。并且γ-H2AX表达水平随着照射后时间延长而逐渐减少，其中，使用不同2名志愿者的相对荧光强度平均值建立照后30min的剂量效应曲线线性方程为Y=0.799D+3.443（R2=0.897），每个志愿者建立的曲线分别为Y=0.779D+2.760(R2=0.865)和Y=0.636D+3.126(R2=0.969)，个体间差异较小；使用1名志愿者重复两次，以相对荧光强度平均值而建立的照后60min的剂量效应曲线线性方程为Y=0.903D+2.993（R2=0.910），每一次独立实验的曲线方程分别为Y=0.901D+3.724（R2=0.910）和Y=1.312D+2.645（R2=0.896），两次比较差异较小；使用不同2名志愿者的相对荧光强度平均值建立的照后60min的剂量效应曲线方程为Y=0.743D+3.396（R2=0.843），每个志愿者建立的曲线分别为Y=0.935D+3.075(R2=0.900)和Y=0.932D+4.334(R2=0.866)，个体间有较小的差异性。从不同志愿者所建立的30min与60min曲线来看，照射后30min的相对荧光强度高于照后60min的相对荧光强度，与时间效应曲线所得结论保持良好的一致性。结论：建立一种流式细胞仪分析外周血淋巴细胞中γ-H2AX表达水平的方法。采用流式细胞仪分析γ-H2AX的相对荧光强度为指标，较好地解决了实验的稳定性和重复性问题，使其有望成为一种估算辐射生物剂量的新方法。正常人本底值较为接近，男性与女性的本底γ-H2AX表达水平无差异，验证了在不同剂量下，个体间的差异较小，而且研究表明使用流式细胞仪，以γ-H2AX表达的相对荧光强度作为分析指标有较高的实验重复性和稳定性，具有成为一种生物剂量估计新方法的潜力。