【摘 要】
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该实验室筛选到的一株黑曲霉(Aspergillus niger)M-1,能产生活性较强的α-葡萄糖转苷酶.本研究以黑曲霉M-1为出发菌株,对其α-葡萄糖转苷酶的产酶影响因素、纯化、酶学性质以
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该实验室筛选到的一株黑曲霉(Aspergillus niger)M-1,能产生活性较强的α-葡萄糖转苷酶.本研究以黑曲霉M-1为出发菌株,对其α-葡萄糖转苷酶的产酶影响因素、纯化、酶学性质以及必需基团进行系统的研究,结果如下:通过对影响黑曲霉M-1产α-葡萄糖转苷酶的单位因素分析,得液态发酵生产α-葡萄糖转苷酶的最适产酶条件为:4﹪A,2﹪B和1﹪G;在33℃,起始pH值为6.5,转速为140r/min,接种量为6﹪,装液量100mL条件下,发酵4.0d,酶活力达296.05U/mL,添加0.1mmol/L的酶作用底物甲基-α-D-葡萄糖苷对产酶的诱导作用最大.通过硫酸铵分极分离,DEAE-cellulose52、DEAE-sepharose CL-6B和Sephadex G-100柱层析,SDS-PAGE等,从黑曲霉M-1酶提取液中分离纯化得到α-葡萄糖转苷酶,分子量约为110kDa.通过以甲基-α-D-葡萄糖苷为底物,对该酶的部分性质进行了研究.在一定条件下分别以对氯汞苯甲酸(pCMB)、巯基乙醇(ME)、乙基替(3-二甲氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐(EDC)、一氯乙酸(ClAc)、乙酰丙酮、N-溴代琥珀酰亚胺(NBS)等化学修饰剂对α-葡萄糖转苷酶的几种氨基酸残基进行选择修饰,并测定其酶活力变化.
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