玛咖生物碱的分离纯化及抗氧化活性研究

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玛咖为十字花科一年生草本植物,其主要有效成分有多糖、氨基酸、生物碱、芥子油苷、异硫氰酸脂等。目前的临床研究以其粗提物的形式为主,主要集中在玛咖醇提物的灌胃对小鼠的生理影响方面,但对其化学成分的某单一组份的分离纯化及活性方面的系统研究很少,影响了玛咖的有效利用,因此提取分离纯化玛咖的有效成分并明确其活性功效具有十分重要的意义。本研究旨在探索作为玛咖活性成分之一的生物碱的有效分离及纯化技术,并对其体外抗氧化活性进行了初步的研究,以期为玛咖的综合利用和新药开发的研究奠定一定的理论基础。1.通过采用化学方法和色谱法研究表明玛咖中的生物碱主要为脂溶性生物碱,同时也存在少量的水溶性生物碱。建立了玛咖生物碱的酸性染料比色含量测定方法,其最佳显色条件:pH4.0的缓冲液6mL及以0.5%溴甲酚绿2mL,混摇1min,静置60min,412nm处检测。2.研究了玛咖生物碱的醇回流提取法、酸水直接提取法及超声提取法,对料液比、温度、时间、提取次数等提取因素进行优化,并做了正交试验。结果表明:超声提取法的总生物碱得率最高,此法最佳工艺条件为:料液比1:40,温度80℃,时间30min,功率200W。此条件下所测得的玛咖生物碱的含量为5.0%。3.在对玛咖生物碱的分离纯化研究中采用了大孔树脂吸附法。通过对四种不同极性的树脂吸附解吸性能的研究,筛选出HP-20大孔树脂。经进一步优化,确定其最佳工艺条件为:上样pH10.0,浓度为0.2mg/mL、上样流速为2mL/min;洗脱选用80%乙醇,流速2mL/min。纯化后的生物碱纯度由24.6%上升为62.4%。4对玛咖生物碱DPPH·和·OH的清除能力以及对K3Fe(CN)6的还原性进行测定。结果表明:生物碱浓度与其DPPH·清除能力成正比,且当生物碱溶液和DPPH乙醇溶液1:1,浓度0.5mg/mL,反应30min时,清除率已达90%以上;玛咖生物碱浓度与其·OH的清除及对铁氰化钾的还原能力能力呈线性正相关。通过对各条件下玛咖生物碱DPPH·清除能力的测定,发现Mg2+、Cu2+起促进作用,Al3+、Zn2+、Fe3+、Ca2+起抑制作用。此外亚硝酸钠和高温分别对其有促进和抑制作用。
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