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目的分析天津医科大学总医院临床患者中分离的耐碳青霉烯肠杆菌科细菌(Carbapenem resistant Enterobacteriaceae,CRE)对常见抗菌药物的耐药性以及产酶情况;探究临床科室以及血流感染耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(Carbapenem resistant Klebsiella pneumoniae,CRKP)住院患者的临床特征,感染相关危险因素,以及临床不同用药方案下的患者预后;对于产KPC(Klebsiella pneumoniae Carbapenemase,肺炎克雷伯菌碳青霉烯酶)的CRKP,基于基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(Matrix-Assisted Laser Desorption/Ionization Time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)的蛋白图谱特征峰建立快速筛查的方法,从而明确我院CRE耐药机制,指导临床医师据此制定合理治疗方案并实现快速筛查产酶细菌,并有效地控制CRE在医院内的传播。方法收集天津医科大学总医院2017年9月-2019年12月临床感染患者分离的251株CRE,剔除重复菌株,采用MALDI-TOF MS质谱仪进行细菌鉴定,采用微量肉汤稀释法(broth microdilution,BMD)、纸片扩散法(Kirby-Bauer,K-B)等对常见常用药物进行体外抗菌药物敏感性试验。采用改良碳青霉烯灭活试验(Modified Carbapenem Inactivation Method,m CIM)并结合EDTA碳青霉烯类失活法(EDTA carbapenem inactivation method,e CIM)的方法对CRE进行产酶表型检测。采用PCR方法检测产酶基因情况,对其标本类型、科室来源、药敏结果、产酶情况进行分析;对于重点科室以及血流感染患者采用回顾性的1:1病例对照研究分析其感染危险因素;对于不同治疗方案的CRKP血流感染患者进行转归情况的比较;评估快速皮特菌血症评分(quick Pitt bacteremia score,qPitt)与快速序贯器官衰竭评分(quick sepsisrelated organ failure assessment,q SOFA)用于CRKP血流感染死亡情况预测的准确性,绘制对应的受试者工作特征(Receiver Operating Characteristic,ROC)曲线;对于产KPC酶的CRKP菌株,通过MALDI-TOF MS质谱仪RUO系统,寻找KPC酶蛋白质的特征峰,建立KPC酶的实验室快速筛查方法。结果(1)251株CRE标本主要为耐碳青霉烯肺炎克雷伯菌(CRKP)235株(93.6%)与耐碳青霉烯大肠埃希菌(CR-ECO)12株(4.8%);分别来自于我院的30个病区,分布广泛,66.5%分离自各科ICU病区。试验菌株对大部分体外药敏试验的抗菌药物耐药,大多数菌株仍对替加环素保持敏感,对多粘菌素B及头孢他啶-阿维巴坦的敏感性良好,未出现携带blamcr-1的CRE菌株。产碳青霉烯酶是我院CRE的主要耐药机制,绝大部分为产KPC酶(84.5%)。(2)NICU因其有创性及介入性操作较多,患者病情大多复杂且危重,易发生院内感染。多因素二元logistic回归分析显示,肝功能异常(OR=20.6,P<0.001)、腰椎穿刺(OR=6.3,P<0.05)、气管镜(OR=9.8,P<0.05)、碳青霉烯类抗菌药物用药治疗史(OR=13.2,P<0.05)及患者年龄(OR=1.0,P<0.05)为NICU患者CRKP感染的独立危险因素,(3)45株血流感染CRKP患者死亡率为60.0%。对于CRKP血流感染患者的治疗,联合用药方案较单一用药方案患者死亡率低,效果更佳。替加环素单药用药时效果不良,患者死亡率较高(87.5%),其联合用药时患者死亡率(58.8%),替加环素联合用药可改善患者的生存率。qPitt评分与q SOFA评分均可用于预测CRKP血流感染患者预后,q SOFA评分的ROC曲线下面积AUC=0.832(95%CI:0.716-0.949 P<0.001)评分效果优于qPitt评分AUC=0.704(95%CI:0.544-0.864P<0.05)。其中,q SOFA评分用于预测CRKP血流感染患者预后的截断值为2,灵敏度为72.2%,特异性为74.1%,阳性预测值为65.0%,阴性预测值为80.0%。qPitt评分用于预测CRKP血流感染患者预后的截断值为2,灵敏度,72.2%,特异性为55.6%,阳性预测值为52.0%,阴性预测值为75.0%。(4)基于MALDI-TOF MS质谱仪RUO系统的检测下,产KPC酶CRKP在4518±8m/z处存在特征峰,有助于临床早期筛查产KPC酶菌株,防治其在院内的播散。结论我院流行的CRE主要为产KPC酶的CRKP,对大多数抗菌药物呈现耐药,对替加环素、多粘菌素、头孢他啶-阿维巴坦的敏感性较好。针对CRKP分离的重要科室NICU,营养状态不佳、曾行有创性操作、曾有碳青霉烯接触史的高龄患者应重点防范CRKP的院内感染发生。对于免疫状态较差的患者应及时监测其感染状态,减少CRKP血流感染的发生。联合用药治疗CRKP血流感染效果优于单药治疗,替加环素单药用药效果较差,联合用药时可改善CRKP血流感染患者的生存率,qPitt评分与q SOFA评分可用于预测CRKP血流感染患者预后,q SOFA评分效果优于qPitt评分。实验室可通过MALDI-TOF MS实现KPC酶的快速筛查,及时准确地为临床提供用药参考,防治阻断CRE在我院传播流行。