树莓品质评价及其RAPD反应体系的建立与优化

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以3个雅安市当地的野生种和8个树莓栽培品种为试材,采用田间生物学调查和室内测试分析相结合的方法,通过对树莓果实的感官品质、营养品质及叶片DNA提取和RAPD技术的建立与优化的分析,旨在找出影响树莓品质的主要指标和评价方法,建立树莓的RAPD反应体系,为树莓的良种选育、品种鉴定与分类、遗传图谱的构建和分子辅助育种等奠定初步的基础。结果表明: 1.树莓果实的品质指标在品种间差异显著。单果重、果实的纵、横径、出汁率等指标以黑莓为最大;红树莓栽培品种次之;野生树莓最小。SOD、花青素、氨基酸、Vc、可溶性固形物和含糖量等指标以野生树莓为最高,栽培品种相对较低。 2.树莓果实的风味主要是由糖、酸含量和糖/酸比决定。树莓果实的含酸量较高,除野生种红泡刺藤(0.55%)和栽秧泡(0.79%)低于1.0%以外,其余树莓的含酸量都在1.0%以上,介于1.28~1.94%,含酸量对树莓果实的风味影响最大。 3.通过主成分分析可将树莓果实的主要品质性状归结为营养品质、加工品质和感官品质3个主成分,其中,SOD、花青素、酸、Vc、糖和蛋白质是影响树莓品质的主要因素。 4.通过果实品质模糊聚类分析可以将供试树莓材料分为3类:无刺黑、匍匐黑、黑A4-17等黑莓类;红泡刺藤、山莓、黄树莓和栽秧泡等野生树莓类;美21、美22、无刺红和澳洲红等红树莓类栽培品种。 5.使用改良的CTAB法可以有效的解决树莓基因组总DNA提取中的褐化问题,提取的DNA呈现白色絮状,其A260/A280介于1.7~1.9之间,完全可以用于RAPD分析。该方法操作简单,成本较低。 6.树莓RAPD扩增程序:预变性94℃ 4min:变性94℃ 1min,退火34℃ 50sec,延伸72℃ 2min,共45个循环;最后在72℃延伸10min。 7.树莓RAPD反应的最佳体系为:模板DNA 60ng;引物0.4μmol/L;Mg2+浓度2.0 mmol/L;dNTP浓度0.24 mmol/L;Taq DNA聚合酶1.5U;10×PCR 2.5μL;总反应体积25μl。
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