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目的目前关于胃癌发生机制的研究主要集中于分子和细胞生物学水平,包括抑癌基因在内的相关基因的失活在胃癌的发生发展过程中发挥重要作用。基因的失活方式有很多,而启动子CpG岛的异常甲基化受到越来越多的重视。最近的研究证实启动子CpG岛甲基化可能在胃癌发生发展过程中都发挥重要作用,并且是导致抑癌基因失活的重要机制。本实验通过检测肿瘤相关基因启动子CpG岛在胃癌组织、癌旁5cm组织和良性胃黏膜组织中的甲基化水平,探讨这些基因启动子异常甲基化与胃癌发生的关系。方法将标本分组为三组,分别是胃癌组织、相应癌旁5cm组织各47例,良性胃黏膜组织(浅表胃炎或正常胃粘膜)20例。常规酚/氯仿法抽提组织标本的基因组DNA,经过亚硫氢酸盐处理,采用目前常用的甲基化特异性PCR(Methylation-specific PCR,MSP)方法检测上述三组标本中死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase, DAPK)基因、上皮钙黏蛋白(epithelial cadherin,E-cadherin或CDH1)基因和p16基因启动子CpG岛甲基化的状况并分析每个基因甲基化程度与临床参数之间的关系。结果20例良性胃黏膜组织中只有1例标本的P16基因启动子区CpG发生了甲基化,其它基因均未发生甲基化。47例胃癌组织中DAPK,E-cadherin和p16三个基因的甲基化发生率分别是:66.0%(31/47)、44.7%(21/47)、63.8%(30/47)。相应47例的癌旁组织中,DAPK、E-cadherin和p16基因的甲基化率分别为:36.2%(17/47)、25.5%(12/47)、12.8%(6/47)。综合这三个基因的甲基化状况, 87.2%(41/47)的胃癌组织和48.9%(23/47)癌旁组织中有一个或一个以上基因发生了甲基化。癌组织中,含有一个基因甲基化的为12(25.5%)例,含两个基因甲基化的为17(36.2%)例,这三个基因全都甲基化的为12(25.5%)例。癌旁组织中,三个基因全部甲基化的有2(4.3%)例,8(17.0%)例标本发生了两个基因甲基化,13(27.7%)例标本发生了一个基因甲基化。三个基因中DAPK基因和p16基因在胃癌组织中的甲基化率明显高于癌旁组织(p<0.05),且有统计学上的相关性(K值分别为:0.296、0.153,p<0.05)。癌组织的甲基化指数(methylated index,MI)明显高于癌旁组织(t=5.139, p<0.01)。胃癌患者中DAPK基因启动子区的甲基化程度分别与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期具有相关性(p<0.05)。癌组织中E-cadherin基因启动子区甲基化程度与肿瘤的浸润深度、TNM分期以及淋巴结转移相关(p<0.05)。p16基因的甲基化程度与患者性别、年龄、肿瘤大小、TNM分期等临床资料无统计学相关性。结论胃癌中DAPK、E-cadherin和p16基因启动子区异常甲基化是一种普遍现象,并且DAPK、E-cadherin基因启动子高甲基化与胃癌的临床病理特点有一定的内在联系,提示其可能是引起胃癌发生的重要原因,并且在胃癌的发展过程中起到重要作用。检测多基因甲基化可能为诊断胃癌提供一种新的方法,并可能为改变肿瘤细胞甲基化水平、基因治疗提供有力的理论依据。