双峰驼作为一种古老而独特的动物,有着不可估量的研究价值。双峰驼属于典型的精清诱导排卵型动物,有明显的季节性发情特征。在繁殖季节与非繁殖季节不同的生活习性使的双峰驼生殖生理存在一定差异。基于本研究团队前期利用蛋白组学技术,发现肌肉生长发育相关差异原肌球蛋白2(TPM2)与原肌球蛋白3(TPM3)。原肌球蛋白2和原肌球蛋白3结构功能既有相似性也有特异性,编码平滑肌、骨骼肌等肌肉异构体的同时,也编码肌肉成纤维细胞异构体,对细胞产生不同的影响。为了进一步揭示TPM2基因和TPM3基因在不同繁殖期双峰驼肌肉中的作用,本研究以繁殖季节双峰母驼为研究对象,通过RT-PCR技术克隆双峰驼TPM2和TPM3基因并进行序列,分析TPM2基因和TPM3基因基本功能;应用免疫荧光技术、免疫组织化学法、qRT-PCR、Western blot法验证TPM2基因和TPM3基因在繁殖季节双峰母驼肌肉具体表达情况,探究TPM2基因和TPM3基因在繁殖与非繁殖季节双峰母驼肌肉组织中的表达模式;以双峰驼肌纤维细胞为基础,通过转染siRNA的方法,探索干扰序列对肌纤维细胞凋亡的影响。结果发现:1.克隆得到双峰驼CDS全长为963 bpTPM2基因,CDS全长为521bpTPM3基因,均无跨膜结构区,属于酸性蛋白。2.非繁殖季节与繁殖季节双峰驼各肌肉组织中(平滑肌、骨骼肌、心肌),TPM2基因和TPM3基因的mRNA和蛋白均有表达,在繁殖季节双峰驼肌肉中为表达上调(P<0.01);骨骼肌中的表达显著高于其它组织(P<0.01)。3.转染siRNA序列的实验组TPM2基因的mRNA和蛋白水平表达量显著低于阴性对照组,且在转染24h的表达量最低(P<0.01)。Bcl-2基因的表达量与TPM2基因表达量在24h、48h有显著降低趋势(P<0.01),而Bax基因的表达量在24h、48h显著升高(P<0.01)。4.转染siRNA序列的实验组TPM3基因的mRNA和蛋白水平表达量显著低于阴性对照组,且在转染48小时的表达量最低(P<0.01)。Bcl-2基因的表达量在24h、48h显著降低(P<0.01),Bax基因的表达量在24h到48h一直显著升高(P<0.01)。综上所述,TPM2和TPM3在双峰驼不同肌肉组织中表达各有差异,参与肌肉收缩过程,对肌肉成纤维细胞凋亡具有一定影响,为更全面揭示原肌球蛋白在肌肉生长发育机制提供理论基础。