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由于兰花种子非常小,胚分化不完全、无胚乳,种子寿命短,在自然条件下萌发率低,以及过量的采挖和生境的恶化,使大量兰花种类处于稀有、濒危乃至灭绝的状态。因此,研究兰科植物种子的非共生萌发和超低温保存,对于提高兰科植物种子的萌发率和成苗率、长期保存兰科植物种质资源以及物种多样性保护均有重要意义。本文以几种地生兰和附生兰种子为材料,研究了兰花种子的非共生萌发体系、兰花种子萌发能力和超低温耐性的变化、贮藏物质的积累以及种子的超低温保存方法。主要研究结果如下:
1、几种地生兰种子的萌发
二叶红门兰和广布红门兰种子的萌发存在明显的差异。添加6-苄基腺嘌呤(6-BA)或活性炭的1/2MS(MurashigeandSkoog,1962)培养基明显地促进二叶红门兰种子的萌发;添加椰乳的1/2MS培养基可提高广布红门兰种子的萌发率;后熟能使二叶红门兰种子的萌发率略有增加;光照抑制2种红门兰种子的萌发。
沼兰种子非共生萌发的最佳方案为:在含有4.5mg·L-1α-萘乙酸(NAA)、10mg·L-16-BA、80g·L-1香蕉泥和30g·L-1土豆泥的KC(Knudson,1946)培养基上萌发,pH5.5,培养温度为25±2℃,光照(强度为20μmolm-2s-1,光周期为12h/12h)。在该方案下,种子萌发率在90%以上。
黄花杓兰种子的最佳萌发方案为在含有0.5mg·L-1NAA、3mg·L-16-BA、20g·L-1土豆泥和5g·L-1活性炭的KC培养基上黑暗下萌发,萌发率达97%。
2、附生兰种子的萌发与成苗
建立了附生兰种子的表面消毒方法和基本萌发培养基,并已申报的国家专利技术(专利申请号:200810118434.6,200810118432.7)。不同授粉方式对五唇兰种子的萌发没有影响。五唇兰种子在我们优化的培养基上易萌发、成苗,添加6-BA和赤霉素(GA3)不利于成苗。
3、种子的超低温保存
五唇兰种子的萌发能力和超低温耐性是在发育过程中逐步获得的。自花授粉和异花授粉的五唇兰种子在授粉后45d获得50%的萌发能力,于授粉后135d达到最大的萌发率,达91%。在授粉后90d开始获得超低温耐性,随着种子的发育,超低温耐性逐步提高。经plantvitrificationsolution2(PVS2)预处理后,30%的授粉后45d种子可耐超低温处理。PVS2预处理能明显地降低发育过程中种子的萌发率,却显著地增加种子的超低温耐性,且依赖于处理时间。同一发育阶段相同处理方式的种子,异花授粉的超低温耐性略高于白花授粉。五唇兰种子超低温耐性的获得与胚内脂类和蛋白质的逐渐积累有关。
4、几种地生兰和附生兰种子的形态观察
兰花种子由种皮和胚组成。胚位于种子的中部,外面由种皮和气腔包裹,而胚的大小不一。种子颜色、种子形状与大小、以及种皮细胞的表面类型在不同的种中明显不同。这些差异可作为兰花植物分类的参数。