MyoD I（MyoGenic differentiation I）基因是成肌调节因子（Myogenic regulatory factors,MRFs）家族的成员之一,于1987年被首次克隆,该基因是骨骼肌生长发育过程中重要的正调控基因（gene）。现已知牛的MyoD I位于15号染色体,总长度2648 bp,有3个外显子。MyoD I基因在肌肉特异基因转录调控过程中起总开关作用,与肌球蛋白、结蛋白、肌细胞生成素等基因的启动子区结合可发挥调控作用,促使它们转录作用的激活（YoshikaAkizawa.,2013;Blum R.,2013）。随着基因工程研究的深入,启动子（promoters）作为基因表达调控的重要元件,对实现外源基因在转基因生物中的高效表达具有重要意义。目前,启动子应用研究所面临的主要问题是如何筛选活性较高的组织特异性启动子,使外源基因在机体中高效稳定表达的同时又具备严格的时空特异性,以克服在动物基因工程中可利用的组织特异性启动子数目不足及调控能力较弱的缺陷。常规育种技术在实现杂种优势利用及优良品种培育方面取得了巨大的成就,但其选择周期长、遗传进展慢等问题一直是培育突破性新品种的“技术瓶颈”。利用转基因技术育种可将外源基因直接导入动物品种中,打破不同生物物种间的界限,能够大幅度缩断世代间隔,有利于培育出新品种。转基因育种可以充分利用所有可能的遗传变异,从而极大地提高遗传改良的幅度和速度,同时还可根据人们的需求创造出一些新型的产品。本试验以关岭牛的MyoD I基因为研究对象,采用实时荧光定量PCR技术（qRT-PCR）、分子克隆、细胞转染、原核显微注射等技术对MyoD I基因组织特异性以及MyoD I基因启动子的活性及功能进行了研究。研究结果如下:1.MyoDI基因在关岭牛不同组织表达量的差异及在肌肉发育过程中表达情况的研究。采用实时荧光定量PCR技术对18月龄关岭牛背最长肌、大腿肌、心、肝脏、脂肪、小肠六个组织的MyoD I基因相对表达量进行检测。同时分析关岭牛胎儿、18月龄、30月龄时期背最长肌组织中MyoD I基因的表达规律。结果显示:MyoD I基因在背最长肌中表达量最高;在出生后的关岭牛肌肉组织中也具有比较高的表达量,且随着出生时间的推移呈上升趋势。推测可能由于背最长肌是肌肉富集地方因此基因表达量较高,随着年龄增大,肌肉丰满度增加,基因表达量也随着增加。2.探究关岭牛4个不同长度的MyoD I启动子的启动活性,初步确定该基因活性较强启动子位置。以关岭牛血液DNA为模板,设计5’端加磷的引物,PCR扩增获得的4个不同长度的关岭牛MyoD I启动子,定向精确替换pEGFP-N3载体的CMV启动子区,构建重组载体pEGFP-N3-MyoD I。通过脂质体法将重组质粒瞬时转染到小鼠C2C12细胞,依据小鼠C2C12细胞发光的强弱判断MyoD I启动子的启动活性。结果显示:本试验成功构建重组真核表达载体pEGFP-N3-MyoD I;4个启动子均具有启动活性,其中P₃启动子在小鼠C2C12细胞中启动活性最高,初步推断P₃启动子为该基因活性较强启动子。3.研究MyoD I基因启动子在小鼠体内的表达情况。本研究通过原核显微注射的方法获得发绿色荧光的转基因小鼠胚胎,为本试验室建立转基因小鼠技术平台提供技术支持。