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喹诺酮类药物(Qlinolones，QNs)是一类十分重要的人工合成的抗菌药物，对革兰氏阴性菌、大多数革兰氏阳性菌、衣原体等具有杀灭作用，广泛应用于兽医临床。然而细菌对该类药物较易产生耐药性，耐药菌株可通过食物链向人类传递，此外动物性食品中ONs残留也可导致人体内敏感细菌产生耐药性，该现象已引起了全世界的关注。目前对动物性食品中ONs残留进行监测是确保食品安全和人类健康的最后一道防线。本研究建立了动物组织中ONs免疫亲和色谱柱净化技术，并建立了可检测ONs药物多残留的免疫亲和-高效液相色谱-荧光检测法、固相萃取-高效液相色谱-荧光检测法和免疫亲和色谱-液相色谱串联质谱法、固相萃取-液相色谱串联质谱法，为监测动物性食品中QNs药物的残留提供技术保障。
利用簇特异性的QNs单克隆抗体制备了可同时净化麻保沙星(marbofloxacin，MAR)、依诺沙星(enoxacin，ENO)、氧氟沙星(ofloxacin，OFL)、培氟沙星(pefloxacin，PEF)、诺氟沙星(norfloxacin，NOR)、环丙沙星(ciprofloxacin，CIP)、洛美沙星(lomefloxacin，LOM)、单诺沙星(danofloxacin，DAN)、恩诺沙星(enrofloxacin，ENR)、沙拉沙星(sarafloxacin，SAR)、二氟沙星(difloxacin，DIF)、恶喹酸(oxolinic acid，OXO)、氟甲喹(flumequine，FLU)等13种QNs的免疫亲和色谱柱。本研究制备的针对喹诺酮类的IAC柱，选用甲醇-PBS(7:3，v/v)作为洗脱溶液；以nmol/mL gel和nmol/mL IgG为单位表示IAC的动态柱容量和绝对柱容量，更能体现IAC的特性。该IAC柱对每种ONs药物的动态柱容量为3.75～6.67 nmol/mL gel(1425～2135 ng/mL gel)，绝对柱容量分别为0.75～1.33 nmol/mL IgG(285～427 ng/mg IgG)。在上述优化的条件下，IAC柱重复使用12次后，QNs的柱容量仍能达到初始柱容量的389/0～45％，满足QNs残留分析要求。IAC柱重复使用20次后，药物的回收率与样品的净化效果无明显变化。
建立了动物肌肉、肝脏组织中10种QNs多残留检测的免疫亲和-高效液相色谱-荧光检测法。动物组织样品用PBS溶液提取，提取溶液直接进行IAC柱净化，用PBS、水分别洗涤，用甲醇-PBS(7:3，v/v)洗脱。以0.5～100 ng/g的浓度水平添加时，鸡、猪肌肉组织中10种QNs药物的平均回收率范围在81.7％～100.4％之间，日内变异系数范围在2.7％～12.5％之间，日间变异系数范围在6.9％～14.3％之间。鸡、猪肝脏组织中10种药物的平均回收率范围在74.7％～94.8％之间，日内变异系数范围在3.9％～12.1％之间，日间变异系数范围在6.95％～16.8％之间。方法的检测限均为0.15 ng/g，定量限为0.5 ng/g。
同时还建立了鸡、猪肌肉组织中10种QNs多残留检测的固相萃取-高效液相色谱-荧光检测法。动物组织样品用PBS溶液提取，HLB固相萃取柱净化。以1.0～100 ng/g的浓度水平添加时，动物肌肉组织中10种药物的平均回收率范围在72.8％～106.8％之间，日内变异系数范围在0.50％～7.4％之间，日间变异系数范围在4.3％～10.3％之间。方法的检测限均为0.3 ng/g，定量限为1.0 ng/g。
建立了动物肌肉、肝脏组织中MAR、ENO、OFL、PEF、NOR、CIP、LOM、DAN、ENR、 SAR、DIF、OXO、FLu等13种ONs多残留检测的免疫亲和色谱-液相色谱串联质谱法。系统以0.1％甲酸水溶液-0.1％甲酸乙腈溶液-甲醇为流动相，进行梯度洗脱。动物组织样品提取后IAC柱净化，甲醇-2％氨水(7:3，v/v)洗脱，0.1％甲酸水溶液复溶，LC-MS/MS测定。在0.3、1.0、10 ng/g的浓度添加水平，空白猪、鸡肌肉组织13种药物添加平均同收率范围在68.3％～97.2％之间，日内变异系数范围在6.6％～16.9％之间，日间变异系数范围在8.8％～23.3％之间。鸡、猪肝脏组织中13种药物的平均同收率范同在62.3％～93.8％之间，日内变异系数范围在7.1％～19.3％之间，目间变异系数范同在12.7％～19.8％之间。方法的检测限均为0.1 ng/g，定量限为0.3 ng/g。同时还研究建立了动物肌肉中13种QNs多残留检测的同相萃取一液相色谱串联质谱法。在0.5、1.0、10 ng/g的添加水平，上述13种药物的平均同收率范围在70.7％～95.1％之间，日内变异系数范围在3.6％～18.8％之间，目间变异系数范围在8.9％～18.2％之间。方法的检测限均为0.15ng/g，定量限为0.5 ng/g。
综上所述，本文建立的动物组织中QNs多残留高效液相色谱荧光检测常规定量方法和液相色谱-串联质谱确证方法的灵敏度、准确度、精密度等各项参数均满足残留分析的要求，可用于实际样品的检测。