丙烯酰胺对斑马鱼胚胎发育的毒性研究

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在我国,聚丙酰胺(partially hydrolyzed polyacrylamide,HPAM)被大量应用于石油开采,并且呈逐年递增趋势。大量的研究表明,其在一定的条件下将发生缓慢降解,形成丙烯酰胺及其他低聚物。丙烯酰胺(Acrylamide,AM)曾被广泛的应用于废水处理,造纸等领域。经过高温加工的食品中发现大量的AM,人们对这一发现已经越来越重视。研究表明,AM是一种中等毒性物质,它具有神经毒性,遗传毒性,生殖毒性及致癌性等。由于目前对环境中AM的含量没有明确的标准,AM的随意排放对环境中的生物及人类存在潜在的威胁。因此对于AM进行毒理学研究是十分迫切和必要的。斑马鱼是毒理学研究中十分理性的脊椎型模型生物,同时,斑马鱼胚胎因其自身独特的优势在遗传学,毒理学等领域被广泛的应用,胚胎通体透明,体外受精、发育,可直接观察到各个发育阶段的变化,受精24h后,主要的组织器官原基己形成,各个脑室、眼睛、耳、血细胞、体节等均清楚可见,发育迅速,依靠吸收自身卵黄囊营养可存活至孵化,可直接观察到药物对它的致畸效应而产生的畸形形态,在毒理学测试中方便观察毒理学测试终点。本实验中采用梯度浓度法,观察斑马鱼胚胎在AM作用下的死亡情况并计数,计算出AM对斑马鱼胚胎24h,48h,96h的半数致死浓度,并以96h的半数致死浓度作为参数,进行长期毒性的研究,观察斑马鱼胚胎在不同浓度AM暴毒的环境中,其自主运动频率,心跳频率两方面进行考察,明确AM对斑马鱼胚胎发育的初期,器官形成时期的影响,通过对其孵化率以及畸形率的考察,明确AM对斑马鱼胚胎整体发育的影响;通过形态学观察,能够直观的反应出AM对斑马鱼胚胎的毒性作用,观察到在不同浓度的AM作用下,胚胎在不同阶段的发育情况。正常情况下,生物体内会产生许多的自由基,少量自由基是机体不可缺少的,过多的自由基就会造成机体的氧化损伤,影响机体的正常功能,SOD能清除体内多余的自由基,保持生物体内的平衡;当生物体受到氧化损伤时,生物体内MDA含量会增加,通过测定胚胎中SOD活性及MDA含量,明确在AM作用下,斑马鱼胚胎受到氧化损伤的程度。实验结果表明AM对斑马鱼胚胎的24h半数致死浓度为377.04mg/L;48h半数致死浓度为214.6mg/L;96h半数致死浓度为192.58mg/L。AM染毒24h后斑马鱼胚胎自主运动的频率增加;染毒48h后的斑马鱼胚胎的心跳频率增加,说明AM对斑马鱼胚胎发育初期有毒性作用,染毒72h后的斑马鱼胚胎孵化率降低,AM暴露下己孵化的斑马鱼出现的畸形率增加,说明AM对斑马鱼胚胎的整体发育有毒性作用;通过对形态学观察的考察,可见AM对胚胎的不同发育时期的有影响,并在发育后期形成心包水肿,脊柱弯曲,停止发育等畸形形态。通过测量结果表明,AM作用下斑马鱼胚胎中SOD活性降低,MDA的含量增加,说明斑马鱼胚胎受到氧化损伤。通过本实验的研究表明,AM对斑马鱼胚胎发育初期及器官形成阶段有毒性作用,通过降低斑马鱼胚胎孵化率,增加畸形率,影响斑马鱼胚胎的整体发育;AM作用下斑马鱼胚胎的SOD活性降低,MDA含量升高,说明斑马鱼胚胎受到氧化损伤。
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