【摘 要】
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膜微囊运输在蛋白质运输和信号传导等过程中起着重要的作用。植物细胞的膜微囊运输过程包括内质网、高尔基体、TGN、MVB和液胞等细胞器和膜结构。近年研究发现,拟南芥Na+/H+
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膜微囊运输在蛋白质运输和信号传导等过程中起着重要的作用。植物细胞的膜微囊运输过程包括内质网、高尔基体、TGN、MVB和液胞等细胞器和膜结构。近年研究发现,拟南芥Na+/H+反向转运体AtNHX5和AtNHX6可能参与了细胞的膜微囊运输过程。但是目前关于A tNHX5和AtNHX6调节膜微囊运输的作用机理还不清楚。研究发现,ESCRT复合体和V-ATPase是细胞膜微囊运输过程的关键因子。我们克隆ESCRT亚基和V-ATPase亚基基因,连接GFP或RFP标签蛋白,并转化拟南芥Col-0和nhx5 nhx6双突变体,制备转基因植株。通过观察ESCRT亚基和V-ATPase亚基的亚细胞分布的变化,分析AtNHX5和AtNHX6调节膜微囊运输的分子机理。本文取得的研究结果如下：1.首先克隆ESCRT复合体亚基AtVPS2, AtVPS22, AtVPS28基因,并采用gateway克隆技术,构建植物表达载体pUBC-VPS2-DN-GFP, pUBC-VPS2-GFP, pUBC-VPS22-GFP 和 pUBC-VPS28-GFP。2.利用花序侵染法和杂交技术,制备ESCRT复合体亚基(VPS28, VP22, VPS2)和V-ATPase的a亚基(VHA-al, V HA-a2, VHA-a3)的转基因植株。3.采用激光共聚焦显微镜观察ESCRT亚基和AtVHA-al亚基的亚细胞分布。我们发现,AtVPS2-DN和AtVPS28在Col-0和nhx5 nhx6中的亚细胞分布不同,表明AtNHX5和AtNHX6可能调节ESCRT亚基的分布与运输。然而,AtVHA-a1亚基在Col-0和nhx5 nhx6中的亚细胞分布一致,表明AtNHX5和AtNHX6可能不影响AtVHA-al亚基的分布与运输。综上,AtNHX5和AtNHX6可以调节ESCRT亚基的分布与运输。AtNHX5和AtNHX6可能是通过调节ESCRT亚基的分布与运输调节蛋白质向液胞的运输过程。
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