左、右归丸对EAE小鼠Th17细胞分化和IL-23/IL-17轴调控机制的研究

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论文共分三个部分进行:金匮肾气丸源流衍变研究、有关左、右归丸临床运用及实验研究进展和多发性硬化中医辨治思路的文献综述、实验研究。金匮肾气丸源流演变研究,主要分为三个方面。首先通过对《金匮要略》中有关条文以及方剂配伍的分析,探讨金匮肾气丸之本义;然后分析历代用药剂量以及及方剂中地黄、桂枝的变化,探讨金匮肾气丸本方的演变;最后收集整理历代金匮肾气丸的衍变方。文献综述方面,收集整理近五年来有关左、右归丸的临床应用及实验研究报道,以整体把握两方在临床实践中的应用范围及主治病症以及实验研究方面的最新进展及研究趋势;从临床表现分析多发性硬化的中医学疾病归属,并参考近年来的研究报道,探讨中医治疗多发性硬化的研究现状及未来的研究思路。实验研究方面,观察左、右归丸对实验性脑脊髓膜炎(EAE)小鼠TH17细胞分化的影响及IL-17/IL-23轴的调控作用目的:①阐明左归丸、右归丸对EAE小鼠治疗作用的差异。⑦阐明左归丸、右归丸对EAE小鼠Th17细胞分化的差异。③阐明左归丸、右归丸对EAE小鼠IL-23/IL-17轴调控作用的差异。方法:建立髓鞘少突胶质细胞糖蛋白35-55(MOG35-55),诱导C57BL/6小鼠实验性变态反应性脑脊髓炎模型,随机分为模型组、泼尼松组,右归丸组,左归丸组,并设正常对照组。观察小鼠的发病情况、神经功能评分及体重变化,HE染色观察CNS病理损伤程度,酶联免疫法(ELISA)检测血清中IL-4, IL-6, IL-17, TGF-β含量,实时荧光定量PCR法检测小鼠脑组织IL-23p19, IL-17mRNA表达。结果:与模型组比较,左归丸、右归丸以及泼尼松灌胃后,小鼠的发病率降低、神经功能评分及体重减轻情况也得到了明显的改善。与正常组小鼠比较,模型组小鼠脑组织中炎症细胞浸润明显;左归丸、右归丸及泼尼松组小鼠的脑组织中也可见炎性细胞浸润,但其较模型组明显减少。与正常组比较,模型组小鼠血清中IL-6, IL-17的含量升高,IL-4, TGF-β含量降低(P<0.05);与模型组比较,左归丸、右归丸及泼尼松组IL-6, IL-17含量降低,IL-4, TGF-β含量升高(P<0.05);与左归丸组比较,右归丸组IL-4, TGF-β含量降低(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组脑组织IL-23p19, IL-17的mRNA表达显著升高,泼尼松、右归丸组与左归丸组小鼠脑组织IL-23p19, IL-17的mRNA表达比模型组低(P<0.01);右归丸组IL-17mRNA表达比左归丸组低(P<0.01)。结论:左、右归丸对EAE小鼠均有防治作用,且右归丸略优于左归丸。左、右归丸均可抑制EAE小鼠Th17细胞分化,且右归丸作用强于左归丸。左、右归丸均可抑制EAE小鼠IL-23/IL-17炎性轴,进而发挥抗炎治疗EAE的作用,右归丸作用强于左归丸。
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