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血管生成是肿瘤赖以生长转移的基础,缺少新生血管的人体肿瘤往往被限制在很小的范围,而血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)及其受体(VEGFR)被证明在新生血管形成过程中起关键的作用,同时最近几年的研究表明,肺癌的发生、发展、转移和预后与其血管生成有着密切的关系。RNAi(RNA interference)是体内一种新近发现的基因沉默现象。在多种生物体内发现,外源性dsRNA(双链RNA)诱导启动RNAi特异性抑制外来基因表达。RNAi效应能够通过实验方法特异地下调靶蛋白的表达,它一般通过siRNA或micro-RNA方式产生效应。
本研究的目的是通过siRNA_PRO程序进行siRNA的定向理性设计,用载体表达方式在体外和体内表达anti-VEGF siRNA,验证siRNA的有效性,为下一步肺癌的治疗性核酸疫苗的研究奠定基础。
实验方法:构建anti-VEGF siRNA重组质粒,利用脂质体将anti-VEGF siRNA重组质粒转染小细胞肺癌细胞系A549,以Western blot检测VEGF蛋白量地的变化,以确定siRNA对VEGF的抑制效果;同时将重组质粒转染鸡胚,验证siRNA在体内是否能抑制VEGF的表达,从而抑制新血管的生成。
结果:在western blot检测中,发现A549细胞的VEGF表达量的降低,同时鸡胚试验中,鸡胚的血管密度明显减少。从而证明本实验设计的针对VEGF基因的siRNA有效抑制VEGF的表达。
结论:通过以siRNA_ PRO理性设计的VEGF siRNA能够抑制VEGF的表达。