目的:观察心脏成纤维细胞经低温缺氧复氧处理后与新生大鼠离体心肌细胞进行Transwell培养,对心肌细胞搏动频率、凋亡率、Cx43-m RNA、Cx43蛋白和磷酸化Cx43的影响,为心脏成纤维细胞的抗心律失常研究奠定基础。方法:健康成年SD大鼠雌雄各5只,体重280±20g,交配繁殖乳鼠。剪取并收集同窝出生1~3天的SD新生大鼠的心室组织,并采用差速贴壁法分离纯化心脏成纤维细胞和心肌细胞进行原代培养。通过心肌细胞特异性肌动蛋白和成纤维细胞特异性波形蛋白进行免疫荧光化学鉴定,并测定心肌细胞和成纤维细胞的纯度。取部分心脏成纤维细胞进行低温缺氧（1小时）复氧（4小时）处理,然后将心肌细胞和心脏成纤维细胞分为2组进行实验:对照组（C组）为心肌细胞与正常成纤维细胞Transwell培养20小时;缺氧复氧组（HR组）为心肌细胞与低温缺氧复氧成纤维细胞Transwell培养20小时。Transwell小室中的微孔膜可物理隔绝心脏成纤维细胞与心肌细胞,避免两种细胞发生接触,但培养液及细胞分泌物可自由通过微孔膜。Transwell培养结束后,倒置显微镜下观察两组心肌细胞的搏动频率,并使用流式细胞仪检测C组和HR组心肌细胞的凋亡率,MTT检测心肌细胞存活率,利用实时荧光定量PCR分析心肌细胞的Cx43-m RNA表达水平,采用Western blotting分析心肌细胞的Cx43总蛋白、磷酸化Cx43蛋白相对表达量。结果:提取的新生大鼠心肌细胞和心脏成纤维细胞经肌动蛋白和波形蛋白免疫荧光化学鉴定,心肌细胞纯度可达到94%,心脏成纤维细胞纯度约为92%。倒置显微镜下观察,HR组心肌细胞搏动频率较C组有所减慢（P<0.05）。流式细胞仪计数结果显示,与C组比较,HR组心肌细胞的凋亡率增加（P<0.05）。MTT检测结果表明,HR组心肌细胞的存活率较C组下降（P<0.05）。PCR实验结果表明,HR组心肌细胞的Cx43-m RNA表达比C组减少（P<0.05）。Western Blotting实验结果证实,与C组比较,HR组心肌细胞的Cx43总蛋白和磷酸化Cx43表达水平均下降（P<0.05）。结论:在不直接接触心肌细胞的情况下,SD新生大鼠心脏成纤维细胞经低温缺氧复氧处理后与离体心肌细胞进行Transwell培养,可减慢心肌细胞搏动频率,降低心肌细胞存活率,增加心肌细胞凋亡,并可减少心肌细胞Cx43-m RNA、Cx43总蛋白和磷酸化Cx43表达。