新疆雪莲系菊科(Compositae)风毛菊属(Saussurea DC)的高山草本植物,是我国珍稀名贵中药材。由于野生资源过度采挖及人工栽培困难,目前新疆雪莲已濒临灭绝。针对新疆雪莲资源匮乏问题,本研究建立了高效的新疆雪莲植株再生体系,构建了重组质粒p3301-rd29b-TaCBF1并导入农杆菌,初步探讨了农杆菌介导转化的条件,结果如下:长势健壮且厚实的叶片是良好易得的外植体,在适宜培养基上,叶片切段愈伤组织发生率接近100%。生长调节剂组合、光照和培养时间对愈伤组织质地和再生能力有重要影响。叶片切段在培养基MS+NAA0.5mg/L+6-BA2.0mg/L上,先经暗培养3周再转光照培养3周后,有70%可直接发生不定芽丛;在MS+NAA0.5mg/L+TDZ1.0mg/L培养基上,暗培养2周转光培养2周后,诱导产生的愈伤组织块大且表面产生大量不定芽突起,这种带有芽突起的愈伤组织转接到MS+NAA0.5mg/L+6-BA2.0mg/L培养基上可以生长成为完全的芽。再生芽转接到MS+NAA0.5mg/L+6-BA0.3mg/L培养基上生长健壮并可进一步增殖,然后转到1/2MS+IBA0.5mg/L+1%活性碳的培养基中生根率达100%,再生苗移栽成活率可达100%。经过多次重复试验,该体系在新疆雪莲的组织培养优化方面获得比较满意的效果。成功构建了含逆境响应型TaCBF1基因的重组表达载体p3301-rd29b-TaCBF1,并转化到根癌农杆菌中,用于探讨新疆雪莲遗传转化的条件。结果表明,Basta是新疆雪莲遗传转化的良好筛选剂,浓度范围为2mg/L～5mg/L比较合适,初步确定出转化条件为:选用LBA4404菌株,菌体重悬液为MS培养液,菌液浓度OD600值为0.4,叶片切段黑暗预培养7d,浸染4min后共培养3d,再经过2周的恢复培养,最后在含2mg/L的Basta和300mg/LCef的筛选培养基中筛选培养。利用该体系获得了一些抗性愈伤组织。