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松口蘑(Tricholoma matsutake)属口蘑科口蘑属,是一种珍惜且濒危的野生食用菌,体内含有大量营养成分被誉为“蘑菇之王”,长白山松口蘑驰名中外,是我国出口松口蘑的重要产地之一。假松口蘑(Tricholoma bakamatsutake)与松口蘑同属,其外观形态与口感均与松口蘑十分相似。按照常规的形态学与显微学难以将松口蘑与假松口蘑准确地辨别。本研究以长白山松口蘑和假松口蘑为材料,利用相关序列扩增多态性(SRAP)分子标记技术分别筛选松口蘑和假松口蘑特异性SRAP分子标记,并经过克隆、测序和重新设计引物分别建立松口蘑和假松口蘑特异性DNA分子标记,从而在分子水平上达到快速、准确地鉴定二者的目的。利用松口蘑和假松口蘑基因池,从300对引物组合中筛选了具有多态性的41对引物组合,其中4对引物ME06和EM26、ME08和EM21、ME09和EM03、ME10和EM06组合在检测的松口蘑个体中均能扩增出422 bp(SK0626-422)、323 bp(SK0821-323)、541 bp(SK0821-541)、280 bp(SK0903-280)、和 650 bp(SK1006-650)的SRAP标记条带,而在假松口蘑个体中未能检出;引物ME01和EM10、ME09和EM07组合在检测的假松口蘑中均能扩增出1168 bp(JSK0110-1168)和563 bp(JSK0907-563)的SRAP标记条带,而在松口蘑个体中未能检出,表明这些SRAP分子标记分别与松口蘑和假松口蘑紧密相关,可用于鉴别松口蘑和假松口蘑。根据引物设计原则针对松口磨 SK0626-422、SK0821-323、SK0821-541、SK0903-280、SK1006-650标记和假松口蘑JSK0110-1168、JSK0907-563标记分别设计了 1对特异性引物,PCR结果在检测的松口蘑个体中均能扩增出243 bp(SK243)和304bp(SK304)的特异条带,而在假松口蘑个体中未能检出;在检测的假松口蘑中均能扩增出502 bp(JSK502)和389 bp(JSK389)的特异条带,而在松口蘑个体中均未能检出。表明松口蘑SK243和SK304和假松口蘑JSK502和JSK389是可靠的、可重复的特异性分子标记,可快速、准确地鉴定松口蘑和假松口蘑。通过引物组合和反应体系优化,获得了一个兼容的多重PCR分子标记SK304和JSK389,PCR结果可以检测到清晰的松口蘑和假松口蘑特异性条带,通过一次PCR即可鉴定二者此外。此外,松口蘑SK243特异性分子标记可在转录水平进行表达,推测该分子标记是基因片段,还有待进一步的鉴定。