【摘 要】
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滥用抗生素污染生态环境,导致耐药细菌的出现,急需寻找安全有效的替代物。益生菌替代抗生素的研究越来越深入,大量研究证明了益生菌的有效性和安全性。益生菌已经应用到生产、生活的各方面,在水产上常利用益生菌预防和治疗有关细菌性疾病。乳酸乳球菌是常用的益生菌之一,被公认为是安全的食品级微生物。益生菌菌株的生理生化研究、安全性评价、组学分析益生菌对机体的影响都有助于科学地开发利用益生菌。本论文从健康罗非鱼肠道
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滥用抗生素污染生态环境,导致耐药细菌的出现,急需寻找安全有效的替代物。益生菌替代抗生素的研究越来越深入,大量研究证明了益生菌的有效性和安全性。益生菌已经应用到生产、生活的各方面,在水产上常利用益生菌预防和治疗有关细菌性疾病。乳酸乳球菌是常用的益生菌之一,被公认为是安全的食品级微生物。益生菌菌株的生理生化研究、安全性评价、组学分析益生菌对机体的影响都有助于科学地开发利用益生菌。本论文从健康罗非鱼肠道内分离到一株对无乳链球菌、副溶血弧菌及大肠杆菌有较强抑菌作用的细菌,采用16S基因分析对其进行鉴定。再对其耐酸、耐胆盐和人工肠胃液、耐药和溶血活性检测后送到中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(CGMCC)。接着用这株菌灌胃小鼠和饲料拌喂罗非鱼,分析其对机体的毒理作用及生长的影响。最后从肠道菌群多样性和脾脏转录组的角度探讨这株菌对斑马鱼和罗非鱼产生生物效应的分子机制,主要结果如下:牛津杯法抑菌中对无乳链球的抑菌圈直径是:10 mm(阴性:8 mm);在p H4的酸性溶液中存活率为38.03%;人工肠胃液中存活率为10.95%;无溶血现象、无较强耐药性。16S r DNA序列鉴定结果表明该菌株为乳酸乳球菌,自编菌株号为KUST48。28d慢性攻毒和7d急性攻毒实验结果显示小鼠无死亡,饮食、饮水正常、生理活动正常,无中毒症状;心、肝、脾、肺、肾的脏器比与对照组无显著差异(P>0.05),心、肝、脾、肺、肾的切片均正常,细胞结构清晰,无细胞坏死、无炎性细胞浸润、无淤血。乳酸乳球菌KUST48拌喂饲料饲养罗非鱼30 d,相比对照组,实验组罗非鱼在体重、体长方面略有增加,没有显著差异(P>0.05)。上述结果表明,该菌株是安全的,可以作为鱼用益生菌。采用乳酸乳球菌KUST48对感染无乳链球菌的斑马鱼进行治疗,分析了肠道菌群多样性,结果得到1022029条有效序列,平均长度是418.26bp,注射了乳酸乳球菌KUST48的治疗组中无乳链球菌的丰度较感染无乳链球菌组显著下降(0.01<p<0.05),且治疗组肠道菌群多样性趋近空白组。采用乳酸乳球菌KUST48治疗感染无乳链球菌的罗非鱼,对罗非鱼的脾脏响应进行了转录组学分析,结果得到了上调和下调的前10个差异表达基因以及29个免疫相关的差异表达基因,免疫相关的差异表达基因有:抗原处理及呈递、Toll样受体信号通路、细胞黏附、补体系统、造血细胞谱系、白细胞迁移、模式识别受体。本研究中得到了一株可在机体内存活且能抑制无乳链球菌的乳酸乳球菌,该菌对机体无毒,并且从肠道菌群的多样性和脾脏转录组的角度分析了该菌株对机体的影响,为后续对该菌株的开发利用提供了理论指导。
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