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背景:乳腺癌是全球新发癌症发病率第二高的恶性肿瘤,严重威胁全球女性健康,如何提高乳腺癌的诊疗水平,是摆在全世界面前的一道难题。阿霉素在乳腺癌临床化疗中存在相当高比例的肿瘤耐药性,因此探索乳腺癌细胞对阿霉素耐药机制及如何改善耐药现象,将大大提高乳腺癌化疗的效果。本课题组前期验证了抑制CDCA4的表达能够抑制乳腺癌细胞的增殖、生长并促进其凋亡。miR-15a与乳腺癌阿霉素耐药的关系及机制目前少有文献报道。因而探讨miR-15a可能靶向作用于CDCA4来调节乳腺癌对阿霉素的化学敏感性的机制将加深我们的认识。目的:本研究旨在探索和了解miR-15a对乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR的肿瘤生物学行为(增殖、迁移、侵袭、凋亡和细胞周期)的影响,及其与可能的靶基因CDCA4表达水平的关系,或可提高我们关于乳腺癌细胞对于阿霉素耐药机制的认识,为以miRNA-15a/CDCA4为靶点进行靶向治疗乳腺癌提供新的研究思路。方法:本研究先用RT-qPCR检测发现MCF-7/ADR细胞、正常乳腺细胞株Hs578Bst、MCF-7的miR-15a-5p表达水平,再选用人乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR作为研究对象,将外源性miR-15a-5p mimics、miR-15a-5p inhibitor转染至MCF7/ADR细胞株中,并用RT-qPCR检测和比较miR-15a-5p mimics转染组、空白组和miR-15a-5p inhibitor转染组三组间miRNA-15a-5p表达水平,在此基础上,我们分别进行了 RT-qPCR检测CDCA4 mRNA表达水平、CCK-8法检测细胞的增殖和生长情况、Transwell实验检测了细胞的迁移和侵袭能力、流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡率。结果:1、RT-qPCR检测发现MCF-7/ADR细胞的miR-15a-5p较正常乳腺细胞及乳腺癌细胞MCF-7明显降低;2、在 MCF-7/ADR 细胞分别转染外源性 miR-15a-5p mimics、miR-15a-5p inhibitor,用RT-qPCR检测和比较各组的miR-15a-5p的表达水平,发现miR-15a-5p mimics 转染组较空白组 MCF-7/ADR 细胞中 miRNA-15a-5p 表达水平显著上升,同时转染miR-15a-5p inhibitor后miRNA-15a-5p表达水平较空白组MCF-7/ADR细胞显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。3、RT-qPCR 检测 miR-15a-5p mimics 转染组、空白组和 miR-15a-5p inhibitor转染组的CDCA4 mRNA表达水平,结果表明CDCA4的表达与miRNA-15a-5p成负相关关系,差异有统计学意义(P<0.05)4.以 CCK-8 法检测 miR-1 5a-5p mimics 转染组、空白组和 miR-15a-5p inhibitor转染组的增殖能力,实验结果表明相比空白组和miR-15a-5p inhibitor转染组,转染miR-15a-5p mimics的MCF-7/ADR细胞组阿霉素抑制率明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。5、以流式细胞仪检测转染后的miR-15a-5p mimics转染组、空白组和miR-15a-5p inhibitor转染组的凋亡率,结果显示转染miR-15a-5p mimics的乳腺癌耐阿霉素细胞株MCF-7/ADR的细胞凋亡率显著增高(P<0.05)。6、以流式细胞仪检测稳定转染的miR-15a-5p mimics转染组、空白组和miR-15a-5p inhibitor转染组。加药前后,三组之间的处于S期的细胞数存在明显差异,加药前在miR-15a-5p mimics转染组细胞中,25.885%的细胞处于S期,处于S期的细胞比例明显高于空白对照组的23.865%和miR-15a-5p inhibitor 转染组的 21.385%(P<0.05);加药后,在 miR-15a-5p mimics转染组细胞中,35.455%的细胞处于S期,处于S期的细胞比例仍然明显高于空白对照组的26.600%和miR-15a-5p inhibitor转染组的22.545%(P<0.05)。加药前后三组之间处于G1期、G2期的比例无明显差异。结论:miRNA-15a的过表达能够抑制乳腺癌耐阿霉素细胞MCF-7/ADR的增殖并促进其凋亡,可能与靶向抑制CDCA4有关,其中miRNA-15a对MCF-7/ADR细胞周期的调控可能是部分机制之一。这些数据为逆转乳腺癌对阿霉素的耐药性提供了科学依据。尽管如此,miRNA-15a在乳腺癌中的其他潜在调节通路及作用仍需要通过进一步实验来阐明。