【摘 要】
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目的为了研究橙皮素能否在体外和体内减轻碘酸钠引起的视网膜损伤及可能机制。方法体外实验选择ARPE-19细胞,分为对照组、碘酸钠(SI)组、橙皮素(HES)+SI组。对照组用正常培养液,SI组给予含有1200μg/m L SI的培养液,HES+SI组给予80μM的HES和1200μg/m L SI共同培养,检测每组ARPE-19细胞凋亡;活性氧(ROS)产生情况;用Ad-m Cherry-GFP-L
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目的为了研究橙皮素能否在体外和体内减轻碘酸钠引起的视网膜损伤及可能机制。方法体外实验选择ARPE-19细胞,分为对照组、碘酸钠(SI)组、橙皮素(HES)+SI组。对照组用正常培养液,SI组给予含有1200μg/m L SI的培养液,HES+SI组给予80μM的HES和1200μg/m L SI共同培养,检测每组ARPE-19细胞凋亡;活性氧(ROS)产生情况;用Ad-m Cherry-GFP-LC3B检测ARPE-19细胞内自噬发生过程;提取ARPE-19细胞内蛋白,蛋白印记技术(western blot)检测Nrf2/HO-1,P62和LC3BⅡ/Ⅰ相关蛋白的变化。体内实验将C57BL/6J雄性小鼠随机分为对照组(Control)、模型组(SI)、治疗组(HES+SI)。HES+SI组用橙皮素50mg/kg每日腹腔注射处理1周后,SI组和HES+SI组均给予碘酸钠(25mg/kg)鼠尾静脉注射1次,HES+SI组继续给橙皮素(50mg/kg·d)腹腔注射,对照组和模型组组同时给等量溶媒直至试验结束。SI处理后1w,2w,3w,4w分别通过光学相干断层扫描(OCT)测视网膜厚度、视网膜电图(ERG)测双眼视网膜感光功能;4w后处死小鼠,取眼球进行石蜡包埋后切片,进行苏木色和伊红(HE)染色观察视网膜结构变化,末端脱氧核苷酸转移酶介导的脱氧尿嘧啶缺口末端标记(TUNEL)法检测视网膜细胞凋亡。结果HES减少了SI引起的ARPE-19细胞凋亡和细胞内ROS的产生,并且显著抑制了SI诱导的ARPE-19细胞内自噬的发生和发展,HES在体内减轻了SI引起的视网膜变薄和色素上皮的紊乱,并在一定程度上保护视功能,western blot显示相对于SI组,HES的处理使Nrf2/HO-1表达增加,P62表达减少,LC3BⅡ/Ⅰ比值减低。结论橙皮素通过抗氧化,抑制RPE细胞自噬和凋亡,进而减轻碘酸钠引起的ARPE-19细胞损伤,并在体内减轻碘酸钠对小鼠视网膜结构的破坏和视功能损害。
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