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目的:肢体淋巴水肿是一种由于淋巴管缺损或阻塞引起的慢性进行性发展的顽疾,主要表现为肢体局部肿胀以及功能受损。目前在淋巴水肿治疗方面尚缺乏理想措施,现有的保守治疗和手术治疗方法均不能有效预防感染和纤维化等并发症。因此,本研究旨在探讨人脐带间质干细胞来源的外泌体(human umbilical cord Mesenchymal stem cell derived exosome,hucMSC-Ex)促进淋巴管再生修复淋巴水肿的作用及机制,以期获得治疗淋巴水肿更有效且安全的方法。方法:(1)分离人脐带间质干细胞(hucMSCs),从hucMSCs培养上清中分离纯化hucMSC-Ex,采用透射电镜(TEM)、Nanosight纳米颗粒示踪分析仪观察hucMSC-Ex的结构,Western blot检测exosome特异表面标志CD9和CD63表达。环行切除Balb/C小鼠尾部淋巴管构建小鼠尾部淋巴水肿模型,水肿部位原位注射hucMSC-Ex,采用小动物活体成像仪观察hucMSC-Ex在小鼠尾部定位。(2)测量小鼠尾部切口原位及远端距切口1cm(D+10)和2cm(D+20)处尾部直径。收集水肿组织,HE染色观察水肿的修复,免疫组织化学染色检测LYVE-1阳性淋巴管并进行计数。(3)淋巴管内皮细胞(HDLECs)与hucMSC-Ex共培养,观察hucMSC-Ex对于HDLECs的增殖、迁移、淋巴小管形成及Ang-2表达的促进作用。(4)采用慢病毒转染过表达或敲减HDLECs中血管生成素2(Ang-2),观察Ang-2对于HDLECs增殖、迁移以及小管形成的调控作用。(5)过表达或敲减hucMSCs中Ang-2构建hucMSC-ExAng2和hucMSC-Exsh-Ang-2,观察hucMSC-ExAng-2或hucMSC-Exsh-Ang-2对HDLECs的增殖、迁移以及小管形成的作用,Western blot和细胞免疫荧光染色检测HDLECs中Ang-2、LYVE-1、Prox1、VEGFR3/p-Akt的表达。结果:(1)小鼠尾部淋巴管环切术后明显水肿,经hucMSC-Ex治疗后,损伤原位、D+10、D+20处尾部直径明显减小。HE染色结果显示,hucMSC-Ex组皮下水肿消退,淋巴管肿胀减少,尾部皮肤厚度明显变薄。免疫组织化学染色显示,hucMSC-Ex修复后LYVE-1(+)淋巴管数明显增多。(2)过表达Ang-2促进了HDLECs的增殖、迁移和小管形成,淋巴管生成能力增强;敲减Ang-2抑制了HDLECs的增殖、迁移和小管形成,淋巴管生成能力减弱。(3)Ang-2过表达的hucMSC-ExAng-2进一步促进了HDLECs的增殖、迁移和小管形成。而Ang-2敲减的hucMSC-Exsh-Ang-2作用后,HDLECs增殖、迁移以及小管形成能力明显减弱。(4)Western blot和免疫荧光结果显示hucMSC-Ex中含有大量Ang-2蛋白,且经hucMSC-Ex作用后淋巴管内皮细胞的Ang-2、LYVE-1、Prox1、VEGFR3和p-Akt表达均明显上调。结论:hucMSC-Ex可促进淋巴管生成修复淋巴水肿,其机制与hucMSC-Ex转运Ang-2调控淋巴管内皮细胞Prox1和Akt/VEGFR3通路活化有关。